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背景及目的胆囊癌是胆道系统常见的恶性肿瘤,在消化系统肿瘤中排名第7。胆囊癌发病较为隐匿,早期缺乏特异性的临床症状,很难做到早期诊断与治疗,很多患者在临床发现时已处于中晚期阶段,失去手术机会,造成预后不佳。5年的生存率仅为5%。虽然R0手术切除是唯一的治愈方法,但能进行根治性手术的患者数量很少,而且有很大的几率会出现术后复发,虽然2010年英国的一项多中心临床试验建议了一线辅助治疗药物,但仍没有公认有效的药物,胆囊癌的生存期仍然不尽人意。针对晚期以及术后复发患者,仍以综合治疗为主。因此寻找合适的辅助治疗药物是十分必要的。肿瘤干细胞和循环肿瘤细胞与肿瘤复发和转移密不可分,这些细胞的存在使肿瘤具有对抗常规和放射治疗的特性,研究已经证明了肿瘤干细胞在肿瘤侵袭和转移中的作用。CD133分子是一种五次跨膜的糖蛋白。研究者认为CD133分子既可以作为人正常干细胞以及多种实体肿瘤的肿瘤干细胞标志物,也可作为一些肿瘤的预后相关的标志物。研究者指出CD133可能与肿瘤干细胞引起的肿瘤发生、转移和化疗耐药有关。因此寻找能够作用于CD133分子的辅助治疗药物能对胆囊癌的治疗提供新的思路和方法。Bufalin、AMD3100对一些肿瘤表现出抑制作用,以及对CD133有抑制作用影响,但在胆囊癌中研究较少,本研究通过免疫组化的方法确定胆囊癌组织及癌旁组织的CD133分子的表达情况,选取Bufalin,AMD3100作为药物,单独或联合作用于胆囊癌细胞株（GBC-SD）后,观察其对细胞增殖、迁移,凋亡以及CD 133蛋白的表达情况的影响,探讨其在胆囊癌中的作用。方法首先收集在本院行手术切除的胆囊癌蜡块标本,通过免疫组化技术检测CD133在肿瘤组织以及癌旁组织的表达水平的差异。在体外实验中,分别用不同浓度的 Bufalin（80、160、320nmol/L）;AMD3100（10、20、40μmol/L）及联合用药（Bufalin 160 nmol/L+AMD3100 20 μmol/L）干预人胆囊癌（GBC-SD）细胞,用CCK8法观察药物对肿瘤细胞增殖产生的影响,用Transwell小室法检测肿瘤细胞迁移能力,Annexin-V/PI法检测细胞凋亡,流式细胞学方法检测细胞CD133分子表达情况,数据统计分析使用SPSS 26.0软件,CCK8结果采用双因素重复测量方差分析,组间采用单因素方差分析,率的比较采用卡方检验,P＜0.05为差异有统计学意义。结果免疫组化的结果显示CD133分子在人胆囊癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织,表达位置定位于细胞质和胞核,流式结果示CD133分子在GBC-SD细胞中阳性表达。Bufalin（0、80、160、320）nmol/L 作用（24、48、72）h 后与对照组（100.00±0.00）相比实验组细胞增殖受到明显抑制（P＜0.05）,抑制率随剂量和时间而变化。160nmol/L的Bufalin作用后细胞迁移的个数为（114.33±5.51）,较对照组（270.67±13.65）,数目明显减少（P＜0.001）。CD133分子表达水平为（1.48±0.14）低于对照组的（3.22±0.46）（P＜0.001）,细胞凋亡率（32.57±0.69）%较对照组（16.35±0.33）%升高（P＜0.001）。AMD3100 组中,与对照组（100.00±0.00）相比 AMD3100 组中 20 μ mol/L作用 48h 细胞活性（87.58±7.10）%,40 μmol/L 作用 48h（67.84±0.75）%,40μmol/L 作用 72h（72.57±10.23）%使细胞增殖明显受抑制（P＜0.05）。40 μmol/L的AMD3100作用后,与对照组细胞迁移个数（270.67±13.65）比实验组（193.33±8.08）明显减少（P＜0.001）。CD133分子表达水平对照组为（3.07±0.11）实验组为（3.22±0.46）差异不具有统计学意义（P＞0.05）。凋亡率对照组为（16.35±0.33）%,实验组为（16.37±1.81）%,差异没有统计学意义（P＞0.05）。联合用药组（Bufalin 160 nmol/L+AMD3100 20 μmol/L）与对照组相比各时间（24、48、72）h细胞增殖均受到抑制（P＜0.05）;对照组细胞迁移个数为（270.67±13.65）实验组为（133.67±6.50）差异有统计学意义（P＜0.001）。CD133分子表达水平（2.19±0.68）低于对照组的（3.22±0.46）（P＜0.001）。细胞凋亡率（33.58±1.67）%较对照组（16.35±0.33）升高（P＜0.001）。结论1.CD133在GBC-SD细胞中阳性表达,在胆囊癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织。2.Bufalin、AMD3100可抑制胆囊癌细胞增殖、迁移。3.Bufalin单独以及与AMD3100联合用药可抑制胆囊癌细胞增殖、迁移、并促进细胞凋亡、抑制CD133分子表达。