空肠弯曲杆菌(Campylobcter jejuni)是引起人肠道感染的主要代表菌之一,它除引起肠炎腹泻外,还易造成食物中毒,并伴发关节炎肝炎格林-巴利综合症等免疫损伤性疾病。其生存条件严苛却易导致人和动物致病。由于目前对全中国各省市零售食品中的污染状况不够清晰,于是本课题开展全国性空肠弯曲菌的分布规律探索,以从宏观上把握污染规律,同时从微观上探索菌株特性,为减少空肠弯曲杆菌导致的食品安全问题提供有效的理论依据。1.本研究从2013年7月至2014年6月进行了全国范围内主要城市的零售食品的空肠弯曲杆菌的污染调查研究,检测七大类零售食品样本共1798份,检出阳性样本59份,平均污染率3.30%(59/1798)。其中阳性样本主要是来自禽畜肉类,且呈现南方污染率高于北方的趋势。根据生化反应和针对基因hipO和16S rRNA基因多重PCR分子鉴定,得到菌株34株。2.空肠弯曲杆菌是苛性营养的微需氧细菌,它不易培养和保藏,本文在研究开始前对菌种的保藏条件进行了探索,选用不同的保藏液与保藏温度进行为期18个月的保藏实验,发现选用含0.025%的FBP(丙酮酸钠、硫酸亚铁和偏重亚硫酸钠三者的混合)的布氏肉汤加20%的甘油保藏效果最好,其次是80%的脱纤维绵羊血和20%的甘油保藏。-80℃的超低温冰箱的保藏效果最好,至少可保藏一年半以上。3.对调查分离的菌株进行遗传多样性研究,包括空肠弯曲杆菌的耐药性实验和耐药基因突变研究、针对鞭毛基因的限制酶长片段多态性(flaA PCR-RFLP)分型研究以及菌株携带11种常见的毒理基因研究。研究发现,菌株多重耐药性很强,有20株菌耐受5-8种抗生素,有2株菌可同时耐受9种抗生素,另外喹诺酮类抗生素的耐药率达到88.5%。运用MAMA-PCR检测耐喹诺酮类基因突变结果显示,有30株菌株在喹诺酮类耐受性决定区gyra基因的第257位碱基C突变为T,致第86位苏氨酸变为异亮氨酸,对喹诺酮的耐受性大大增强。MAMA-PCR结果与药敏实验相符合。对于空肠弯曲杆菌的flaA PCR-RFLP分型结果,运用聚类软件分析显示在相对相似系数0.81时,可将菌株分成21个型别,显示出菌株之间的差异性较大。另外,通过运用PCR检测与粘附、定植以及侵袭相关的11种毒理基因发现,菌株之间携带毒理基因的差别不大,基本都携带粘附和定植相关基因,携带率均在60%以上,但是与侵袭相关基因cjaB, pldA,imaA三者在分离菌株中的携带率均在10%以下。4.对空肠弯曲杆菌的生物膜的形成和控制进行探索,发现空肠弯曲杆菌单独形成生物膜的能力很弱,在大气的状态下培养生物膜形成量多于微需氧条件下,实验中让其分别与大肠杆菌和铜绿假单胞菌共生培养,发现生物膜的形成量远高于单独生长的生物膜量。实验还摸索了运用不同浓度纳米氧化锌处理后的生物膜形成状况,通过用结晶紫染色法半定量并运用扫描电镜和激光共聚焦实验检测发现纳米氧化锌的浓度在0.5mg/ml的状况下对空肠弯曲杆菌的生物膜形成有较好的抑制效果。本研究进行的空肠弯曲杆菌污染规律探索及菌株特性研究,为评估空肠弯曲杆菌在食品中的污染风险及致病性提供了帮助,对空肠弯曲杆菌生物膜的研究则为进一步探索空肠弯曲杆菌在食品中的污染控制问题提供参考。