【摘 要】
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目的:翻译控制肿瘤蛋白（TCTP）在蛋白质结构上高度保守,在多种肿瘤中高表达。本研究主要探索抑制TCTP表达对慢性淋巴细胞白血病（CLL）细胞增殖、凋亡、化疗药物敏感性的影响。方法:以CLL细胞株JVM3和MEC-1为研究对象,使用TPT1-RNAi和control-RNAi慢病毒感染CLL细胞。以5例p53正常和5例存在17p缺失或p53突变的CLL患者外周血分离的CD19阳性的淋巴细胞为研究对
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目的:翻译控制肿瘤蛋白（TCTP）在蛋白质结构上高度保守,在多种肿瘤中高表达。本研究主要探索抑制TCTP表达对慢性淋巴细胞白血病（CLL）细胞增殖、凋亡、化疗药物敏感性的影响。方法:以CLL细胞株JVM3和MEC-1为研究对象,使用TPT1-RNAi和control-RNAi慢病毒感染CLL细胞。以5例p53正常和5例存在17p缺失或p53突变的CLL患者外周血分离的CD19阳性的淋巴细胞为研究对象,使用si-TPT1-Homo-371和si-control转染CLL原代细胞。使用CCK-8法检测细胞增殖以及增殖抑制率,使用流式细胞术检测细胞转染效率、细胞周期及细胞凋亡,使用定量PCR检测相关基因m RNA相对表达水平的改变,使用Westernblot检测相关蛋白表达水平的改变。所有实验均重复三次。结果:（1）利用TPT1-RNAi在JVM-3和MEC-1细胞中构建抑制TCTP表达的稳定细胞系。CCK-8法检测细胞增殖活性,结果显示抑制TCTP表达可使CLL细胞株增殖活性减弱。感染si-TPT1-Homo-371后,JVM-3细胞（70.46±2.4%vs.49.1±3.9%,P=0.0014）和MEC-1细胞（62.81±5.6%vs.53.73±1%,P=0.0378）中G0/G1期细胞均增多;JVM-3细胞（32.1±2.1%vs.10.43±2%,P=0.002）和MEC-1细胞（21.06±3.19%vs.10.5±1.28%,P=0.006）的总凋亡率均增加。以不同浓度氟达拉滨作用于TPT1-RNAi组和对照组,发现氟达拉滨对TPT1-RNAi组细胞增殖抑制明显高于对照组。随后用相同浓度的氟达拉滨作用于TPT1-RNAi组和对照组,TPT1-RNAi组细胞凋亡比率更高。在JVM-3细胞株中,抑制TCTP表达,p53和p21 m RNA和蛋白的相对表达水平均上调。抑制MEC-1细胞株中TCTP表达,p53和p21表达水平无明显改变。通过转染si-TPT1-Homo-371下调CLL原代细胞中TCTP的表达。转染48h后检测凋亡、m RNA表达,结果示抑制TCTP表达后,细胞凋亡增加,TCTP m RNA表达水平下调。在p53功能正常的CLL原代细胞中,TP53和P21 m RNA表达增加;在存在p53异常的CLL原代细胞中,TP53和P21 m RNA水平无明显改变。（2）使用氟达拉滨和γ射线诱导CLL细胞发生细胞损伤。JVM-3和MEC-1细胞经氟达拉滨和γ射线处理后,细胞凋亡比例增加。在JVM-3细胞中,TCTP、p53和p21表达水平均上调;在MEC-1细胞株中,TCTP表达水平显著上调,p53和p21表达水平无明显改变。结论:综上,抑制TCTP表达后,p53功能正常或异常的CLL细胞均会表现为增殖受抑,细胞凋亡增加及细胞对氟达拉滨和γ射线的敏感性增加。分析TCTP和p53的表达水平时发现TCTP和p53之间存在环路抑制。
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