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目的帕金森病(PD)是一种常见的与年龄相关的神经变性疾病,主要特征是黑质多巴胺能神经元的进行性丢失和变性。JNK信号转导通路是MAPK通路的一条重要分支,它在细胞周期、生产、凋亡和细胞应激等多种生理和病理过程中起重要作用。目前研究证据表明帕金森病发生有JNK信号转导通路的参与。丁苯酞是从我国南方的一种水芹菜籽中分离出的有效成分,简称NBP,又名芹菜甲素,是中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所人工合成的消旋体,从80年代开始冯亦璞带领该所开始研究NBP的药理作用：能改善缺血区局部脑血流,增加缺血区毛细血管的数量,增加缺血区脑血流量,改善缺血性脑能量代谢,缩小梗死面积,减轻神经功能损伤程度,减轻脑水肿；还可改善线粒体功能,增强呼吸链功能,能改善线粒体能量泵,增加抗氧化作用,从而发挥抗凋亡；能增加大鼠全脑缺血纹状体细胞外液氨基酸和多巴胺含量。故本试验依据JNK在PD发病的作用来研究NBP对MPTP诱导的多巴胺能神经毒性是否具保护作用。我们选择丁苯酞用于MPTP制备C57BL／6帕金森病小鼠模型,用免疫组织化学染色方法和westernblot检测帕金森病小鼠黑质多巴胺能神经元TH、DAT、p-JNK/JNK表达情况,观察并分析其表达意义。方法1、动物分组：30只C57BL／6小鼠采用完全随机分组法分为以下3组,每组10只。(1)正常对照组(NS+植物油)：腹腔注射与MPTP组等体积生理盐水5 d,再注射与治疗组等体积植物油14d。(2)MPTP组(MPTP+植物油)：采用MPTP(30 mg/kg)连续5 d腹腔注射,然后改用与治疗组等体积植物油注射14 d。(3)NBP治疗组(MPTP+NBP):先以MPTP(30 mg/kg)连续腹腔注射5 d,然后丁基苯酞(NBP40 mg/kg)腹腔注射14 d。每组动物于第19天处死后取脑组织进行固定石蜡包埋,取中脑黑质部位切片进行免疫组织化学染色；另外一侧脑组织提取出黑质后迅速置于-80℃冰箱冷冻用于westernblot。2、模型制备：MPTP(30 mg/kg):连续5 d腹腔注射,注射药物后小鼠即刻出现步态跚,易激惹,毛及鼠尾竖起等反应,约5～10 min后复常态,即视为模型制备成功。3、免疫组织化学染色方法检测TH、DAT的表达4、Westernblot方法检测p-JNK、JNK的表达结果1、与正常对照组相比,MPTP组小鼠黑质多巴胺能神经元中的TH阳性神经元表达数目明显减少(P<0.05)；与MPTP组相比,NBP治疗组小鼠黑质多巴胺能神经元中TH阳性神经元表达数目增加(P<0.05),二者均具有统计学意义。2、与正常对照组相比,MPTP组小鼠黑质纹状体多巴胺能神经纤维中的DAT阳性神经纤维表达数目明显减少(P<0.05)；与MPTP组相比,NBP治疗组小鼠黑质纹状体中DAT阳性神经纤维数目表达增加(P<0.05),二者均具有统计学意义。3、正常对照组几乎未见p-JNK表达,MPTP组可见p-JNK/JNK的表达明显增加,而且表达较正常对照组强,二者差别有统计学意义(P<0.05),NBP治疗组p-JNK/JNK表达较MPTP组下降,二者差别有统计学意义(P<0.05)。结论丁苯酞可增加帕金森病小鼠黑质多巴胺能神经元TH、DAT的表达,减少p-JNK表达,拮抗JNK信号转导通路,改善多巴胺能神经元功能,这为丁苯酞可能成为治疗PD药物的临床可能性提供了实验依据。