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目的:构建lyGDI及△N19lyGDI的带有荧光标记的真核表达载体并分析外源性表达lyGDI及△N19lyGDI对辐射诱导细胞凋亡和细胞放射敏感性的影响并分析其机制;研究恢复细胞P53蛋白表达对细胞辐射诱导凋亡及LyGDI的影响。方法:1.设计lyGDI及△N19lyGDI基因上下游引物,PCR扩增基因片段,分别构建pEGFP-DF-lyGDI及pEGFP-DF-△N19lyGDI真核表达载体。经酶切、PCR、测序验证其正确性;脂质体法转染真核细胞MCF-7后免疫印迹检测融合蛋白的表达,免疫组化观察融合蛋白在细胞内定位;2.脂质体法以pcDNA3.1-wt p53转染L929细胞,建立稳定转染细胞株,RT-PCR、免疫印迹法验证;生长曲线法检测细胞增殖能力的的变化;X射线照射后,克隆法检测放射敏感性的变化;流式细胞术检测细胞凋亡率的改变,免疫印迹法检测相关蛋白的表达;3.利用构建成功的稳定转染lyGDI及△N19lyGDI基因的L929、A549细胞。检测转染lyGDI对辐射诱导两种细胞凋亡率的影响,探究其对细胞放射敏感性的影响,免疫印迹法检测相关蛋白的表达。结果:测序证明基因序列完全正确,免疫印迹和免疫荧光染色检测到目的蛋白表达;恢复细胞P53蛋白的表达抑制了L929细胞的增殖能力,促进辐射诱导的细胞凋亡并诱导LyGDI断裂;稳定转染lyGDI及△N19lyGDI的L929细胞辐射诱导的凋亡率上升,辐射处理后观察到融合蛋白断裂成相对应的LyGDI及△N19LyGDI蛋白;稳定转染lyGDI的A549细胞辐射诱导的凋亡率上升,增加细胞放射敏感性,在该细胞受到8 Gy 60coγ射线照射后4到24小时可以观察到LyGDI蛋白断裂成△N19LyGDI蛋白。结论:1.成功构建带有GFP绿色荧光标记的pEGFP-DF-lyGDI及pEGFP-DF-△N19lyGDI真核表达载体;2.恢复L929细胞的P53表达抑制细胞增殖能力,增加细胞放射敏感性并发现P53外源性表达可以诱导LyGDI断裂;3.LyGDI在L929、A549两种细胞中外源表达后能够增加辐射诱导细胞凋亡敏感性: