背景:高迁移率组蛋白B1(HMGB1)的异常激活及活化能够释放多种炎症因子,可诱发肺部炎症细胞大量聚集和气道上皮损伤,在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的发生和发展中起着至关重要的作用。糖皮质激素在ARDS中发挥抗炎作用,而长时间大剂量使用会降低细胞对糖皮质激素的敏感性。因此,针对ARDS中出现的糖皮质激素耐受现象,本文选择茚地那韦用于改善ARDS中糖皮质激素受体低下,并对其可能的抗炎作用机制进行研究。目的:研究茚地那韦对实验性ARDS的抗炎作用,以及联合甲强龙用药改善甲强龙单一用药引起的糖皮质激素受体低下作用。方法:本论文包括两大部分,在第一部分中,采用LPS刺激HMGB1活化,Western Blot检测活化的HMGB1、TLR-4以及下游核转录因子κB(NF-κB)蛋白的表达,通过NF-kB抑制剂(BAY11-7084)和HMGB1siRNA干扰技术研究茚地那韦在肺微血管内皮细胞(HPMEC)中所涉及的机制,同时分析了茚地那韦对AT I(肺泡I型上皮细胞)细胞的凋亡、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)和水蛋白通道5(Aquaporin 5)表达的影响。另外,在体内实验中,采用LPS二次打击建立大鼠实验性ARDS模型,通过提取肺组织,HE染色、病理评分研究肺组织的病理变化,采用Western Blot和免疫组化的方法研究肺组织中Aquaporin 5的分布以及HMGB1/TLR-4/NF-κB信号通路,进一步阐述体内茚地那韦对实验性ARDS的保护作用。第二部分利用LPS与甲强龙联用建立糖皮质激素受体低下的ARDS模型,随后用HE染色、病理评分检测肺组织病理变化,体外western blot检测ARDS大鼠肺组织匀浆中糖皮质激素受体α(GR-α)、核因子κB抑制蛋白α(IκB-α)以及磷酸化NF-κB(p-NF-κB)的表达变化,研究茚地那韦在细胞与实验动物中对甲强龙导致的糖皮质激素受体低下ARDS的影响。结果:茚地那韦温孵HPMEC后,HMGB1、其受体Toll样受体4(TLR-4)以及HMGB1下游p-NF-κB表达下调,而血管内皮细胞钙黏素(VE-cadherin)表达上调;AT I细胞损伤减轻的标志物晚期糖基化终末产物(RAGE)和Aquaporin 5表达升高。与单用甲强龙温孵组相比,甲强龙联合茚地那韦治疗96 h抑制了胞质中GR-α和IκB-α的下降以及细胞核中p-NF-κB的增加。茚地那韦改善了 LPS二次打击诱导的ARDS模型大鼠中肺微血管的通透性,降低肺组织病理学评分和HMGB1、TLR-4和p-NF-κB的表达,上调保护性蛋白RAGE,Aquaporin 5和VE-cadherin蛋白表达;与单用甲强龙注射组相比,甲强龙联合茚地那韦灌胃给药增加了 ARDS模型大鼠肺组织中GR-α和IκB-α蛋白的表达,同时使p-NF-κB蛋白表达减少。结论:茚地那韦通过调节HMGB1/TLR-4缓解实验性ARDS大鼠的肺系统炎症反应,减轻了糖皮质激素单一治疗ARDS引起的糖皮质激素受体低下。