目的:构建非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis,NASH）细胞模型和小鼠模型,探讨NASH肝细胞线粒体氧化应激以及环磷酸腺苷反应元件结合蛋白H（cyclic AMP-responsive element binding protein H,CREBH）表达的变化;探索调节CREBH的表达对NASH肝细胞线粒体氧化应激的影响以及调控的分子机制。方法:1.棕榈酸（palmitic acid,PA）干预AML12肝细胞诱导肝细胞脂质过载,检测肝细胞线粒体超氧化物水平以及肝细胞线粒体膜电位的变化。检测CREBH、去乙酰化酶3（Sirtuin 3,SIRT3）、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLR family pyrin domain containing 3,Nlrp3）炎症通路的表达以及肝细胞蛋白的整体乙酰化水平。测定锰超氧化物歧化酶（manganese superoxide dismutase,MnSOD）分子活性。2.构建稳定过表达CREBH的AML12细胞系,PA干预诱导肝细胞脂质过载模型。检测线粒体超氧化物、膜电位变化。检测SIRT3、Nlrp3炎症通路的表达,检测MnSOD的表达、赖氨酸的乙酰化以及其活性,检测肝细胞蛋白整体乙酰化。3.构建CREBH-OE-siSIRT3 AML12细胞系,PA干预诱导肝细胞脂质过载模型。检测肝细胞线粒体超氧化物水平以及肝细胞线粒体膜电位变化。检测SIRT3、Nlrp3炎症通路的表达。检测MnSOD的表达、赖氨酸乙酰化以及其活性,检测肝细胞蛋白整体乙酰化。4.构建全身CREBH基因敲除小鼠,采用高脂（high fat,HF）饮食和蛋氨酸胆碱缺乏（methionine-choline-deficient,MCD）饮食喂养小鼠模拟NASH动物模型。检测CREBH、SIRT3、抗氧化酶以及Nlrp3炎症通路的表达。结果:1.在肝细胞脂质过载模型中,肝细胞线粒体超氧化物水平明显升高、MnSOD活性下降、线粒体膜电位下降,Nlrp3炎症小体被激活;线粒体氧化应激随PA浓度的增加而加剧。CREBH随PA的浓度增大而增加,SIRT3在400μMPA干预24h后出现显著增加,肝细胞蛋白整体乙酰化程度随PA浓度增大而升高。2.在脂质过载肝细胞模型中,过表达CREBH减轻了PA诱导的肝细胞线粒体氧化应激、上调了SIRT3的表达,过表达CREBH拮抗了PA诱导的MnSOD表达下降,降低了 MnSOD赖氨酸乙酰化水平和肝细胞蛋白整体乙酰化水平。沉默SIRT3的表达后,CREBH对肝细胞线粒体的保护作用减弱。3.在HF和MCD饮食诱导的小鼠NASH模型中,CREBH、SIRT3以及MnSOD的表达下降;CREBH基因敲除后,SIRT3的表达降低、MnSOD的表达下降且赖氨酸乙酰化水平升高,Nlrp3炎症小体活化,肝细胞线粒体氧化应激加重。结论:在NASH的发生发展过程中,脂质过载诱导肝细胞内线粒体氧化应激,导致CREBH和SIRT3的表达变化,通过CREBH/SIRT3信号通路调控MnSOD的乙酰化,影响MnSOD活性,从而减轻肝细胞内线粒体氧化应激,达到抑制肝细胞内炎症反应甚至纤维化形成的目的。