【摘 要】
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该研究采用PCR方法,从大鼠基因组DNA中扩增出了3.6kb的COL1A1基因启动子,并将其克隆到T载体上.采用不同的双酶切,获得长度分别为3.6kb、2.3kb、1.7kb的启动子片段,分别与报告
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该研究采用PCR方法,从大鼠基因组DNA中扩增出了3.6kb的COL1A1基因启动子,并将其克隆到T载体上.采用不同的双酶切,获得长度分别为3.6kb、2.3kb、1.7kb的启动子片段,分别与报告基因EGFP融合,构建三个真核表达载体.用脂质体转染法将它们导入到ROS17/2.8细胞中,通过G418筛选,获得若干个稳定表达EGFP的细胞株.通过细胞荧光强度半定量分析,显示报告基因EGFP表达差异.细胞在回转器模拟微重力下培养48小时后,其荧光强度增强,即EGFP的表达升高,提示COL1A1基因启动子的活性上升和Ⅰ型胶原合成增加.Ⅰ型胶原免疫组化实验显示模拟微重力下,成骨细胞的Ⅰ型胶原合成、分泌增加.该研究建立了一个用EGFP报告基因来研究模拟微重力下基因启动子活性变化的实验模型,为今后进一步揭示空间骨丢失的详细机理以及广泛展开微重力下细胞信号传导和基因表达变化的研究奠定了基础.
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