【摘 要】
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溴氨酸是一种重要的蒽醌染料中间体,由于溴氨酸的水溶性好,且位于蒽醌结构两边的苯环同时受到两个羰基影响,结构稳定,难被普通微生物降解,因此,在环境中有较长的停留期。研究
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溴氨酸是一种重要的蒽醌染料中间体,由于溴氨酸的水溶性好,且位于蒽醌结构两边的苯环同时受到两个羰基影响,结构稳定,难被普通微生物降解,因此,在环境中有较长的停留期。研究溴氨酸的脱色酶及降解机理对了解蒽醌染料的降解机理及广泛开展蒽醌化合物的微生物降解研究具有极其重要的意义。本实验的目的是通过对溴氨酸脱色酶的研究考察溴氨酸的降解机理。用无机盐培养基加入溴氨酸对菌进行培养。考察了完整细胞对溴氨酸的降解特性。无机盐配方确定为:K2HPO41.5g/L,KH2PO41.5g/L,乙酸钠1g/L。以0.01mol/L的磷酸钾为最佳缓冲溶液,湿重为10mg/ml的完整细胞的降解条件为:温度30℃,pH=7.0,摇床转速为150r/min。对溴氨酸的降解产物进行了液相色谱和质谱分析,检测到新产物邻苯二甲酸和已经被确认的产物2-氨基-3-羟基-5-溴苯磺酸和2-氨基-4-羟基-5-溴苯磺酸。说明溴氨酸直接开环生成了邻苯二甲酸和2-氨基-3-羟基-5-溴苯磺酸和2-氨基-4-羟基-5-溴苯磺酸。用超声破碎的方法提取出可以脱色溴氨酸的粗酶,首先确认了该酶为诱导酶,而非组成酶。而后考察了该粗酶对溴氨酸的降解条件:以NADH为必需的辅酶,该酶的最佳反应温度为50℃,最佳pH值为7.5。以溴氨酸为底物,在最佳反应条件下,测定了粗酶降解溴氨酸的动力学特性,得到该酶的最大反应速率为Vmax=6.993×10-9mol/（min·mg protein）,米氏常数Km=0.3mmol/L。对粗酶降解溴氨酸后的产物进行液相色谱和质谱分析,得到产物邻苯二甲酸和2-氨基-3-羟基-5-溴苯磺酸和2-氨基-4-羟基-5-溴苯磺酸,与完整细胞降解溴氨酸的产物一致。
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