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双孢蘑菇（Ag aricus isporus）性平、味甘，能补脾益气，能增强人体抗病能力，具有长久的食用史。从蘑菇中可提取一种多糖类物质(PS-K)，其具有抵抗人体病毒及抗癌作用，能增强小鼠腹腔吞噬细胞的吞噬功能，并随着剂量的增高，胸腺指数、脾指数也有增高的趋势，能增强机体的免疫功能。但目前双孢蘑菇中的多糖成分及其抗肿瘤免疫调节机制仍未完全清楚。本文以双孢蘑菇为研究对象，对双孢蘑菇多糖(ABP)的提取、纯化、分级、纯度鉴定、结构研究、免疫调节活性等进行了较为系统的研究。
主要研究结果如下：
1.ABP提取工艺的优化：通过正交方差分析法对ABP的提取工艺条件进行了优化，结果表明：以新鲜双孢蘑菇为材料，ABP的最佳提取工艺条件为液料比30：1(mL/g)、提取时间120 min、提取温度70℃，在此提取条件下，ABP得率可达1.02％。醇沉优化条件，最终确定以14％为最佳提取液浓度和95％为最佳乙醇浓度；对于脱蛋白优化步骤，采用Sevag法进行脱蛋白处理，最终确定4次为最佳的脱蛋白次数。
2.ABP的分离纯化：采用DEAE-52纤维素阴离子交换柱和Sephadex G-200葡聚糖凝胶层析交换柱对ABP进行分离纯化。经DEAE-52纤维素分离得到6个组分，按由中性到酸性的顺序分别是：ABPI、ABP II、ABP III、ABPⅣ、ABPV、ABPVI。经过Sephadex G-200的进一步纯化，ABP I、ABP II、ABP III均被分离出2个亚组分，分别为ABP Ia、ABP Ia:ABP Iia、ABP Iib；ABP IlIa、ABP llIb。
3.ABP各组分的免疫调节活性评价：采用抗肿瘤模型和原代培养小鼠脾脏细胞的抗原增殖模型评价ABP及其各组分对生物机体的直接抗肿瘤作用和免疫调节作用。结果表明，与正常对照组相比，ABP及其各组分不能对肿瘤细胞HepG有直接的杀伤作用，不能直接抑制肿瘤细胞的生长；而ABP及其各组分均对刀豆蛋白(ConA)和脂多糖(LPS)的免疫调节作用有明显的刺激作用，能协同这两种抗原刺激小鼠免疫细胞的增殖，提示50、1000uh/ml剂量组的ABP及其各组分对小鼠的免疫调节具有一定的增强作用。结果表明，1000 ug/mL剂量ABP Ia体外能够显著增强淋巴细胞增殖，且呈现剂量依赖性，经过48 h后仍能维持其激活刺激增殖作用。
4.ABP Ia的理化分析：结果表明，ABP Ia是一种不含核酸和蛋白质的均一多糖。HPGPC法测定ABP Ia组分的相对分子量为784，059 Da;ABP Ia是主要由核糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成的杂多糖，摩尔质量比=2.08：4.61：2.45：22.25：36.45：89.22：1.55；高碘酸氧化法证实ABP Ia具有1-2、1-4位点的糖苷键结构，可能存在1-3位点糖苷键，几乎不具有1-6位点糖苷键；红外光谱结构分析得出ABP Ia含有羟基等，组成的单糖环构型为吡喃环，是a-型吡喃多糖；原子力显微镜显示出ABP Ia在浓度为5‰时呈分散单链结构，而且链型弯曲起伏，5％时聚集螺旋成棒状体，棒状螺旋长度约为132-207nm，螺距约为27.344-31.250nm。本研究结果首次发现并确证了ABP的免疫调节活性，并明确其量效关系，分离出活性多糖ABP Ia组分，明确了ABP Ia的相对分子量，对双孢蘑菇多糖的后续研究有重要价值，为双孢蘑菇多糖保健品的开发提供理论基础和技术指导。