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目的: 通过测定在体动物脑组织亚细胞中凋亡蛋白Smac/Diablo (第二个线粒体源的caspase激活物/低等电点的IAP直接结合蛋白)、caspase-9的表达，进一步了解在新生大鼠HIBD后凋亡蛋白Smac/Diablo、caspase-9相互关系及其对脑细胞凋亡的作用机制,以及参附注射液对该线粒体凋亡途径干预作用。
方法: 构建新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE)动物模型，新生7d龄SD大鼠随机分为假手术组（S）、生理盐水对照组（C）、参附治疗组（SF），按照观察点又分为3h、6h、12h、24 h，3d、7d 6个亚组，每亚组例数为8只。实验分为3部分: 1. 脑细胞亚细胞器分离后Western-blot方法测各时间点线粒体和胞浆中Smac/Diablo,caspase-9蛋白的表达；2. RT-PCR法测各时间点Smac/Diablo mRNA的表达；3. Tunel法测脑皮层神经元凋亡。
结果:
1. Western-bolt蛋白印迹显示胞浆中Smac/Diablo在缺氧缺血（HI）后3h即明显增加（P＜0.01），HI后24 h胞浆Smac/Diablo蛋白表达达到峰值，3d后明显下降，7d接近假手术组，但仍较正常偏高(P＜0.01)，参附组在12h、24h、3d胞浆Smac/Diablo表达均较生理盐水对照组低(P＜0.01或0.05; e.g: 24h 0.843±0.114 vs 1.119±0.095)；线粒体Smac/Diablo蛋白表达在HI后6h、12h有下降(P＜0.01)，但24h后即恢复正常与假手术组比较无统计学意义(P＞0.05)，参附组在6h、12h时间点上线粒体Smac/Diablo水平较生理盐水组明显高（P＜0.01或0.05）；caspase-9活化片段在HI后3h即较假手术组明显增加，并高表达持续至HI后3d，7d恢复正常，生理盐水组caspase-9表达在24h达到峰值，参附组caspase-9表达在12h、24h、3d较生理盐水组明显下降(均P＜0.01; e.g: 24h 0.738±0.035 vs 1.076±0.053)，表达高的峰也提前到12h；
2. RT-PCR条带显示HI后6h Smac/Diablo mRNA表达开始升高，24h达到峰值，3d开始下降，7d仍高于假手术组，参附组Smac/Diablo mRNA表达在12h、24h、3d、7d较生理盐水组比较明显下降(P＜0.01或0.05)。
3. Tunel显示HI后3h皮层神经元凋亡细胞数即明显增加，24h达到高峰，3d开始下降，7d时仍高于假手术组(均P＜0.01)，参附组凋亡数在24h、3d、7d这3个时间点上均较生理盐水组明显下降(P＜0.01或0.05; e.g: 24h 45.7±2.1 vs 60.7±2.2 )。
结论:
1.新生大鼠HI后脑皮层神经元存在Smac/Diablo蛋白胞浆转位，伴有胞浆活化caspase-9表达增加，参附可减少HI后Smac/Diablo蛋白的胞浆转位，并减少caspase-9的活化；
2.Smac/Diablo、caspase-9参与了新生大鼠HIBD后迟发性神经元损伤的病理机制；
3.参附注射液可减少Smac/Diablo的转位及转录以减少神经元的凋亡。