一氧化氮对小白杏冷藏特性及有机酸代谢相关基因表达的研究

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小白杏是新疆特有的鲜食杏主栽品种之一,鲜果成熟期集中,贮运性差,销售期仅为3-5 d。由于杏果属呼吸跃变型果实,低温贮藏过程中极易发生风味逸失的现象,造成果实风味寡淡,严重降低了果实的食用性和商品性。一氧化氮(NO)作为一种生物活性分子已经被证明可以减缓果蔬采后品质劣变进程。本文选用新疆轮台小白杏为研究材料,研究外源一氧化氮(NO)处理对低温条件下小白杏果实采后贮藏品质的影响,筛选出了适宜的NO处理浓度和处理时期用于小白杏的保鲜,确定了高效液相(HPLC)法测定小白杏果实中有机酸成分的分析方法,深入分析小白杏有机酸含量变化及其相关基因的表达,探讨NO处理对小白杏采后有机酸代谢的调控作用。本文主要研究结果如下:1.通过对NO适宜处理浓度和处理时期的筛选,筛选出NO处理浓度为110μL/L和处理时期为小白杏绿熟期。NO处理可延缓小白杏果实采后硬度的降低、延缓果皮色泽的转变,保持果实外观品质。NO处理能降低膜脂过氧化程度,维持了细胞膜的完整性,并能提高小白杏果实自由基的清除能力,从而延缓衰老引起的代谢紊乱,延长小白杏果实的货架期。2.建立了HPLC法测定小白杏果实有机酸的分析条件。其有机酸的分析条件为:Platisil ODS-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相为CH3OH-0.01 mol/L KH2PO4(v/v,3:97),p H=2.4;流速为0.4 mL/min;柱温为30℃;检测波长为210 nm;进样量为10μL。3.小白杏果实中的主要有机酸为苹果酸和柠檬酸,且以苹果酸含量为主,其次为柠檬酸。通过分析对照和110μL/L NO处理对绿熟期小白杏采后有机酸代谢的影响,可知110μL/L NO处理在一定程度上延缓了贮藏期间绿熟期小白杏果实中苹果酸和柠檬酸的流失,降低了有机酸代谢速度。4.研究NO对绿熟期小白杏果实有机酸代谢相关酶活性的影响,结果表明影响绿熟期小白杏果实中苹果酸和柠檬酸含量变化的代谢酶分别是ME、MDH和CS、PEPC、IDH、Cyt-ACO,其中MDH是苹果酸合成的重要酶,ME是苹果酸降解的关键酶;CS、PEPC是与采后小白杏果实柠檬酸合成相关的酶,IDH、Cyt-ACO则是与柠檬酸降解相关的酶。110μL/L NO处理可提高绿熟期小白杏果实的CS、PEPC、MDH活性,降低IDH、Cyt-ACO活性。NO处理有提高杏果实中苹果酸和柠檬酸含量的现象,可以减缓杏果实采后有机酸的流失。5.采用RT-PCR技术,克隆出了小白杏果实中Pa MDH、Pa ME、PaCS、PaPEPC、PaACO、PaIDH基因的cDNA片段,经BLAST验证比对,为所需目的片段,大小分别为243 bp、257bp、349 bp、182 bp、212 bp、100 bp。6.分析了NO处理对绿熟期小白杏有机酸代谢相关基因表达的影响,结果表明110μL/L NO处理对PaMDH基因起上调作用,对PaME基因起下调作用;推迟了PaCS、PaPEPC和PaIDH基因的表达高峰,减缓了小白杏果实苹果酸、柠檬酸含量的下降,但对贮藏后期的PaACO基因起上调作用,而使柠檬酸含量有下降趋势。
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