第一部分 金银花水提物对双歧杆菌、乳酸杆菌体外生长的影响 【目的】 探讨金银花水提物对双歧杆菌、乳酸杆菌体外生长的作用。 【方法】 (1)制备金银花水提物浓度为 50%、25%、12.5%、6.25%、3.125%、2%、1.0625%的 BL 肉汤和 MRS 液体培养基;(2)两歧双歧杆菌 Bif1101 和保加利亚乳酸杆菌标准株经复活、厌氧培养、水洗等,制备成 6×108个/ml 纯双歧杆菌和乳酸杆菌细菌悬液;(3)在细菌对数生长期,取一定量在药物培养液中生长的培养液稀释后接种到平板,最后作平板菌落计数;(4)不同培养时间点测定稀释 10 倍后含不同浓度金银花水提物的细菌培养液和对照组细菌培养液的 OD 值,计算各培养基 OD 增加值(△ OD),E=△ OD 样品 - △ OD 对照 ,E>0,提示有促生长作用;(5)测定含不同金银花水提物浓度的双歧杆菌、乳酸杆菌的培养液 20h 、24h 时的 PH 值。 【结果】(1)含 6.25%浓度金银花水提物双歧杆菌、乳酸杆菌培养液的菌落计数与对照组间无显著差别;当金银花水提物浓度<6.25%时,双歧杆菌、乳酸杆菌培养液的平板菌落计数显著高于对照组;金银花水提物浓度>6.25%,则双歧杆菌、乳酸杆菌培养液的平板菌落计数显著低于对照组;(2)金银花水提物浓度≤6.25%的乳酸杆菌培养液 20h、24h 的 E>0;金银花水提物浓度≤3.125%时,双歧杆菌培养液 20h、24h 的 E＞0；（3）含 6.25%浓度金银花水提物两种细菌培养液20h、24h 的 PH 值与对照组间无显著差别；金银花水提物浓度＜6.25％时，双歧杆菌、乳酸杆菌的培养液 20h、24h 的 PH 值显著低于对照组；金银花水提物浓度＞6.25％，则双歧杆菌、乳酸杆菌的培养液 20h、24h的 PH 值显著高于对照组。 【结论】体外实验结果显示金银花水提物的浓度影响双歧杆菌、乳酸杆菌的生长,即（1）低浓度金银花水提物可以促进双歧杆菌、乳酸杆菌在体外的生长。（2）高浓度金银花水提物则抑制双歧杆菌、乳酸杆菌在体外的生长。重庆医科大学硕士研究生学位论文 5第二部分金银花水提物对卵清蛋白过敏小鼠肠道菌群的影响【目的】 观察金银花水提物对卵清蛋白(Ovalbumin OVA)过敏BALB/c 小鼠肠道菌群的影响。【方法】 对象:选用 4-5 周龄无鸡蛋喂养的 BALB/c 雌鼠为实验对象,经 OVA 肠道基础致敏 24 小时后灌服金银花水提物的小鼠为预防组(Y 组);以第一次肠道激发 4 小时后灌服金银花水提物的小鼠为治疗组(T 组);同时设置单纯 OVA 肠道激发为阳性对照(Ch)组、生理盐水为阴性对照(NS)组和单纯灌服金银花对照组(N 组)。Y 组、T 组和 N 组根据灌服金银花水提物的不同浓度随机分为高(H 100%)、中(M 50%)、低(L 25%)组。方法:(1)ELISA 法检测速发型变态反应时金银花水提物对小鼠体内 OVA 特异性 IgE 影响;(2)小鼠小肠切片 HE 染色及甲苯胺兰染色观察金银花水提物对 OVA 过敏 BALB/c小鼠小肠组织形态的影响;(3)采用平板活菌计数法分析小鼠肠道菌群变化;(4)细菌鉴定采用 PCR 分子生物学技术和生化反应法。【结果】 (1)H、M 浓度金银花水提物可使 YH、YM和 TH、TM组致敏小鼠血清中 OVA 特异性 IgE 水平降低至正常水平;(2)HE 染色和甲苯胺兰染色可见 YH、YM和 TH、TM组的小鼠小肠绒毛上皮细胞局灶性坏死、脱落,固有层淋巴细胞、浆细胞等炎症细胞浸润、小肠肥大细胞聚集和脱颗粒现象,均较 Ch 组显著缓解;(3)平板菌落计数结果显示,Ch 组小鼠肠道双歧杆菌、乳酸杆菌计数增加,大肠杆菌、葡萄球菌计数降低;YH、YM、TH和 TM组小鼠肠道双歧杆菌、乳酸杆菌计数增加,大肠杆菌、葡萄球菌计数降低,达到正常小鼠水平;(4)L