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目的:
探讨溴苯腈对离体小鼠肝组织线粒体膜电位及呼吸控制率(RCR)的影响及N-乙酰半胱氨酸(NAC)的干预作用。
方法:
1、清洁级ICR雄性小鼠,6~8周龄,体重(20±2)g,采用差速离心法分离提取其肝组织线粒体,并配制成浓度为0.5 mg/ml的线粒体悬浮液。
2、将配制好的线粒体悬浮液随机分成3组,每组设8个样本:A组为正常对照组,未加任何药物;B组为溴苯腈染毒组,线粒体悬浮液中加入终浓度为130 mg/L的97%溴苯腈原药;C组为NAC保护组,线粒体预先用0.5 mM的NAC预处理,30℃培养箱内静置0.5 h后,再加入终浓度为130 mg/L的97%溴苯腈原药。各组均于30℃培养箱内孵育0.5 h后,用氧电极法测线粒体Ⅲ态呼吸速率(S3)、Ⅳ态呼吸速率(S4)、呼吸控制率(RCR)。
3、将配制好的浓度为0.5 mg/ml的线粒体悬浮液随机分成3组,每组设6个样本:A组为正常对照组,正常线粒体悬浮液不予任何处理,37℃,5%CO2,孵育40min;B组为溴苯腈染毒组,线粒体悬浮液1ml,37℃,5%CO2,孵育30min后,加入0.1mg溴苯腈原药,37℃,5%CO2,孵育10min。C组为NAC保护组:线粒体悬浮液1ml中加入一定量NAC(使NAC浓度达到10mmol/ml),37℃,5%CO2,孵育30min,再加入0.1mg溴苯腈原药,(37℃,5%CO2,孵育10min)。各组采用亲脂性阳离子荧光染色剂羰花青(JC-1)染色,(共聚焦)荧光显微镜观察线粒体膜电位变化。
4、统计学处理:计量资料数据以x±s表示,采用专业统计软件包SAS9-13英
结果:
1、溴苯腈染毒组线粒体Ⅲ态呼吸速率(0.031±0.008 nanoatoms oxygen/mg.min-1)、RCR(1.820±0.181)明显低于对照组(P<0.01),Ⅳ态呼吸速率(0.017±0.004nanoatoms oxygen/mg·min-1)显著高于对照组(P<0.01);NAC保护组线粒体RCR(4.253±0.210)低于对照组(P<0.01),但显著高于染毒组(P<0.01);NAC保护组S3(0.046+0.005nanoatoms oxygen/mg·min-1)高于染毒组、S4(0.011±0.001 nanoatoms oxygen/mg·min-1))低于染毒组,差异显著(P<0.01),但S3、S4与对照组比较无明显差异(P>0.05)。
2、共聚焦荧光显微镜观察:溴苯腈染毒组线粒体红色荧光明显减弱甚至消失,NAC保护组线粒体红色荧光较B组溴苯腈染毒组增强,但较对照组弱,三组间差别明显。
结论:
1、溴苯腈染毒能使离体小鼠肝组织线粒体的电子呼吸链传递速度减慢,线粒体氧化磷酸化呼吸耦联减低;NAC保护能加快溴苯腈染毒小鼠肝组织线粒体电子呼吸链传递速度,提高线粒体氧化磷酸化耦联程度。
2、溴苯腈染毒能使离体小鼠肝组织线粒体膜电位(△()m)降低,内膜功能损伤;NAC保护能提高线粒体膜电位(△()m),减少溴苯腈对离体小鼠肝组织线粒体内膜功能的损伤,