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第一部分:
苦玄参药材指纹图谱研究
目的:
建立苦玄参药材的高效液相色谱指纹图谱,得到对照图谱,为科学评价与有效控制苦玄参药材质量提供新方法。
方法:
1.提取:比较了不同提取溶剂、不同提取方法的提取效果,选择提取成分较多,提取率较高的提取条件。
2.色谱条件:选用合适的色谱柱及检测波长,调整流动相的组成、配比、流速,调节柱温,使色谱图符合指纹图谱研究的要求。
3.系统适用性试验:在已确定的色谱条件下,考察指纹图谱中苦玄参苷IA的分离度和理论板数。
4.精密度试验:取同一份样品溶液,重复进样5次,记录保留时间和峰面积。
5.稳定性试验:取样品溶液分别于0、4、6、8、12、24h进样,记录保留时间和峰面积。
6.重现性试验:取同一批苦玄参药材5份,平行制备样品溶液,进样,记录保留时间和峰面积。
7.指纹图谱的建立:分别取不同产地苦玄参药材15批,制备供试品溶液,进行指纹图谱分析。
8.数据分析:使用“计算机辅助相似度评价软件”进行数据处理,对15批苦玄参药材进行比较分析。
结果:
1.提取:以70%甲醇超声提取30min为佳,具有稳定和效率高等优点。
2.色谱条件:色谱柱为C18ODS2柱(4.6×250mm,5μm,大连依利特公司);乙腈-0.3%磷酸为流动相进行梯度洗脱;流速为1ml/min;柱温为30℃;检测波长为264nm,进样量10μl。
3.系统适用性试验:在此色谱条件下,苦玄参苷IA的保留时间约为53min,按苦玄参苷IA峰计算理论板数应不低于30万,与其它色谱峰的分离度大于1.5。
4.精密度试验:各主要色谱峰相对保留时间和峰面积占总峰面积5%以上峰的峰面积比值均无明显变化,其RSD分别为0.04%-1.49%和0.22%-0.77%,精密度良好。
5.稳定性试验:内参比各主要色谱峰相对保留时间及峰面积占总峰面积5%以上峰的相对峰面积值均无明显变化,其RSD分别为0.05%-0.92%和0.33%-1.47%,稳定性良好。
6.重现性试验:各主要色谱峰相对保留时间和峰面积占总峰面积5%以上峰的峰面积比值均无明显变化,其RSD分别为0.05%-1.27%和0.39%-2.0%,重现性良好。
7.指纹图谱的建立:得到15批苦玄参药材的指纹图谱,并生成对照指纹图谱。
8.数据分析:15批苦玄参药材指纹图谱相似度较好,以相关系数为测度,相似度均>0.8。
结论:
本文建立了苦玄参药材的HPLC指纹图谱,得到其对照图谱,方法重现性和精密度良好,有助于苦玄参药材的标准化种植及药材的质量控制.
第二部分:
苦玄参有效成份积累动态研究
目的:
测定不同月份生育期的苦玄参中苦玄参苷IA的含量,找出在不同月份生育期中苦玄参苷IA的积累动态,为建立苦玄参规范化种植基地提供实验依据。
方法:
在同一,片地采集所有样品,采用高效液相色谱法,C18ODS2柱分离,乙腈-0.3%磷酸溶液(36∶64)为流动相,流速为1ml/min,检测波长为264nm,柱温为30℃。
结果:
苦玄参中苦玄参苷IA的平均含量从头年6月份到次年1月份分别为0.21%、0.36%、0.36%、0.22%、0.16%、0.16%、0.07%、0.05%,它们的含量随月份的变化而变化,以7、8月份含量较高。
结论:
所建立的高效液相色谱含量测定方法灵敏度高,专属性强,重现性好,能准确、快速的进行测定,以苦玄参苷IA的含量为标准,苦玄参最佳采收时间为7、8月份。