细菌转化前体产CoQ10及其分离纯化工艺的研究

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辅酶Q10(Coenzyme Q10,CoQ10)是一种存在于自然界的脂溶性苯醌类化合物,在人体细胞内参与能量制造及活化,是预防动脉硬化形成最有效的抗氧化成份。本研究旨在完善一种高效高产的辅酶Q1o生产和提纯工艺。首先考察了培养基成分、培养条件以及补料方式菌对鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas sp. ZUTE03)高密度培养和CoQ10生产的影响,在优化了相关参数后最终取得了高达15.71g/L的菌体浓度。考察了固定化高密度菌株在三相流化床反应器中转化萃取耦合工艺产CoQ1o的效果,结果显示其产量可达到468.71mg/L。同时对根癌农杆菌AGL1(Agrobacterium tumefaciens AGL1)产CoQ10能力及其转化条件进行研究,该菌株的较优转化条件为:前体组合50mg/L对羟基苯甲酸和80mg/L茄尼醇;转化温度30℃;转化体系为50mL两相体系,即25mL有机相(正己烷)和25mL水相(pH6.8的磷酸缓冲液);转化时间为9h;细胞通透剂为2%豆油。在此条件下,该菌株的转化液COQ10产量和单位菌体产量分别达96.4mg/L和118.7mg/g。摇瓶研究结果表示AGL1的产量已达到E03同样条件下的三倍。然后研究了新型HPD系列大孔吸附树脂初步分离纯化COQ10的工艺条件,经测试确定使用HPD300型大孔吸附树脂作为分离材料,其分离工艺为:25℃下以甲醇为吸附溶剂,以1.5mL/min的上样速度上样6BV,洗脱方式为分步洗脱方式即以70%乙醇预洗脱后再用丙酮溶液将CoQ1o洗脱。经大孔吸附树脂初步纯化后的CoQ1o粗品的纯度由原来的56.3%提高至初步分离后的高达96%的纯度,收率大约在69%左右。最后结合硅胶柱层析工艺获得了纯度高达99%的CoQ1o成品,收率在91%左右。
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