目的杀虫剂的大量、连续使用导致了蚊虫抗药性的发生和发展,研究蚊虫抗药性产生的机制并进行适宜治理乃当务之急。随着现代生物技术的不断发展,针对不同的物种,越来越多的抗药性基因被陆续发现。库蚊是淋巴丝虫病和脑炎的传播媒介,其抗药性的产生成为媒介病防治的一大难题。淡色库蚊主要分布在我国北方地区,本课题针对淡色库蚊对氯氰菊酯产生抗性的机制与铁代谢相关蛋白基因(铁蛋白和铁调节蛋白)是否存在一定关系进行实验研究,这对深入研究蚊虫抗药性机制具有重要的理论意义。方法设计引物,扩增目的基因全长、纯化测序、序列分析,荧光定量PCR检测铁蛋白基因和铁调节蛋白基因的表达水平。采用假设检验中的t检验方法,对两种不同处理的淡色库蚊样本体内铁蛋白和铁调节蛋白基因表达量进行统计分析。分别扩增淡色库蚊不同发育阶段的基因片段,观察随系统发育铁蛋白和铁调节蛋白基因表达是否发生变化。CCK-8检测C6/36细胞活力,构建载体重组质粒,转染C6/36细胞,测定转染重组质粒和空载质粒细胞活力,观察载入目的基因的C6/36细胞活力变化。结果通过以上实验设计,我们成功扩增了淡色库蚊铁蛋白和铁调节蛋白基因片段,经荧光定量PCR测定,淡色库蚊敏感品系铁蛋白荧光定量(Fn敏)和抗性种群铁蛋白荧光定量(Fn抗)结果显示,铁蛋白基因在抗性品系淡色库蚊中的表达量是敏感品系的10倍左右。铁调节蛋白基因荧光定量结果显示,淡色库蚊铁调节蛋白基因表达量在抗性品系淡色库蚊中降低,t检验结果显示两样本体内铁蛋白和铁调节蛋白基因表达差异具有统计学意义。随系统发育,铁蛋白基因在淡色库蚊各发育阶段无明显变化,在抗性品系蚊虫中表达量比敏感品系高。铁调节蛋白基因在淡色库蚊各发育阶段表达也无明显差异,在抗性品系淡色库蚊中表达量比敏感品系低。CCK-8检测转染重组质粒和空载质粒的C6/36细胞活力,发现转染了载有铁蛋白基因片段质粒的C6/36细胞活力较转染空载质粒的C6/36细胞高,转染载有铁调节蛋白基因片段质粒的C6/36细胞活力较转染空载质粒的C6/36细胞低。结论敏感及氯氰菊酯抗性品系淡色库蚊中铁蛋白和铁调节蛋白基因表达量存在差异,铁蛋白基因在抗性品系淡色库蚊中的表达量明显高于敏感品系淡色库蚊;铁调节蛋白基因在抗性品系淡色库蚊中的表达量降低,提示铁蛋白基因和铁调节蛋白基因可能与蚊虫抗药性相关;不同发育阶段淡色库蚊中铁蛋白和铁调节蛋白基因表达未表现明显变化,各发育阶段铁蛋白表达量抗性品系均比敏感品系表达量高,各发育阶段铁调节蛋白表达量抗性品系均比敏感品系低;目的基因转染至白纹伊蚊C6/36细胞,观察发现,在氯氰菊酯环境中,转染铁蛋白基因重组质粒的细胞生存率高于转染空载质粒的细胞,转染铁调节蛋白基因重组质粒的细胞生存率低于转染空载质粒的细胞。