不同浓度超声微泡及质粒对pEGFP-N1-VEGF重组质粒转染效率的研究

来源 :临床心血管病杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mkunaini520
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目的:探讨不同浓度的微泡及质粒对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)存活率及pEGFP-N1-VEGF重组质粒转染率的影响,初步探索最佳的质粒及微泡浓度。方法:将状态良好的HUVEC交叉植入24孔板中,对照组仅进行超声辐照,实验组中加入不同浓度质粒和微泡后进行超声辐照。将不同浓度的质粒和微泡分别两两组合加入各实验组。48h后锥虫蓝染色检测细胞存活率,荧光显微镜定性观察绿色荧光蛋白的表达,流式细胞仪定量检测基因转染率,Western blot检测离体细胞中VEGF的表达。结果:实验组中各亚组均有不同程度的荧光蛋白表达。当质粒浓度≤20μl/ml时,基因转染率随质粒浓度增加而增加,差异有统计学意义(P<0.05);当质粒浓度>20μl/ml时,基因转染率随质粒浓度增加改变不明显,差异无统计意义。细胞存活率与质粒浓度无明显关系。基因转染率随微泡浓度呈先增加后降低的趋势,差异有统计学意义(P<0.05),当微泡浓度为150μl/ml时,基因转染率最高;而细胞存活率随微泡浓度的增加而降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测对照组条带显示较弱,各实验亚组有不同程度条带显示,强于对照组。结论:在一定的辐照参数时,不同浓度质粒和微泡基因转染率不同,质粒浓度为20μl/ml、微泡浓度为150μl/ml是比较理想的条件,此时的细胞存活率为(85.69±0.27)%,基因转染率为(23.86±0.43)%。
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