【摘 要】
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目的研究HCG11和miR-543对血肿瘤屏障通透性的作用及可能机制。方法应用Real-time PCR检测人脑微血管内皮细胞(endothelial cells, ECs)和人胶质瘤微血管内皮细胞(glioma end
【机 构】
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中国医科大学基础医学院神经生物学教研室;
【基金项目】
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国家自然科学基金(81573010);辽宁省科学技术计划项目(No.2017225020);沈阳市科技计划项目(No.17-231-1-46)
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目的研究HCG11和miR-543对血肿瘤屏障通透性的作用及可能机制。方法应用Real-time PCR检测人脑微血管内皮细胞(endothelial cells, ECs)和人胶质瘤微血管内皮细胞(glioma endothelial cells, GECs)中HCG11和miR-543的表达以及二者的结合作用。应用Lipo3000将HCG11表达沉默和/或miR-543过表达质粒载体分别转染GECs,验证转染效率后,通过测量跨内皮细胞阻抗值(transendothelial electric resistance, TEER)和辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)渗透量,检测血肿瘤屏障通透性。应用Real-time PCR和Western blot检测紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5的表达。荧光素梅报告基因系统分析miR-543与HCG11的结合作用。结果 HCG11在GECs中表达显著增加,miR-543在GECs中表达显著降低;HCG11表达沉默、miR-543过表达均显著降低TEER值,增加HRP渗透量,降低ZO-1、Occludin和Claudin-5的蛋白表达水平。MiR-543与HCG11存在靶向结合作用。HCG11表达沉默显著增加miR-543的表达,增加血肿瘤屏障通透性。结论 HCG11通过靶向结合miR-543调节血肿瘤屏障通透性。
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