【摘 要】
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目的:建立同时检测样品中人疱疹病毒6型(human herpesvirus 6,HHV-6)和人疱疹病毒7型(human herpesvirus 7,HHV-7)核酸的单一实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法.方法:分析HHV-6、HHV-7型代表株基因组核酸序列,选取同源序列设计单一探针和分别针对HHV-6和HHV-7的扩增引物,通过试验比较和分析,确定使用混合引物对检测没有影响,对扩增温度进行优化后建立Real-time PCR方法.对所建立方法的特异性、检测下限(limit of d
【机 构】
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中国食品药品检定研究院,北京102629;山东省广饶县人民医院,东营257300
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目的:建立同时检测样品中人疱疹病毒6型(human herpesvirus 6,HHV-6)和人疱疹病毒7型(human herpesvirus 7,HHV-7)核酸的单一实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法.方法:分析HHV-6、HHV-7型代表株基因组核酸序列,选取同源序列设计单一探针和分别针对HHV-6和HHV-7的扩增引物,通过试验比较和分析,确定使用混合引物对检测没有影响,对扩增温度进行优化后建立Real-time PCR方法.对所建立方法的特异性、检测下限(limit of detection,LOD)、定量下限(limit of quantitation,LOQ)、线性、准确性进行验证,使用该方法对临床样品和生物制品生产用细胞基质进行检测,并与套式PCR的检测结果进行比较.结果:经比较,HHV-6和HHV-7扩增引物混合对检测性能无影响,可分别或同时检测样品中存在的HHV-6/HHV-7核酸.特异性验证中,293细胞及PRV、VSV、VZV、EB1、EB2、EB3、CMV1/2/3、HSVI、HSVII基因组DNA样品对检测无干扰.方法的LOD和LOQ分别为:1×102 copies和1×103 copies,线性范围为1×103～1×107 copies.使用建立的Real-time PCR方法和套式PCR方法分别对86份临床血浆样品和15种生产用细胞基质样品进行检测,两种方法在临床样品中分别检出8份和4份阳性,x2分析表明,real-time PCR方法检出率显著高于套式PCR方法,15种细胞基质样品无阳性.结论:所建立的Real-time PCR方法可在单个扩增反应中同时检测HHV-6和HHV-7核酸,检测灵敏度高于传统的套式PCR方法,可用于临床样品和生产用细胞基质样品的检测.
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目的:探索决明子及其易混淆品望江南的生药学鉴定方法.方法:借鉴植物学有关形态鉴定与分类的术语和研究方法,应用体式显微镜和光学显微镜等仪器设备及数码成像技术手段,从正面、侧面、腹面、表面等外观性状,横剖面和纵剖面特征,以及横切面和粉末的显微特征,对2种药用决明子商品及易混淆品望江南进行比较鉴别和数字化表征.结果:2种药用决明子及易混淆品望江南在形状及剖面形状等形态特征上存在明显差异,在栅状细胞及草酸钙簇晶等粉末显微特征上存在着明显差异.结论:通过本次实验研究,归纳了2种药用决明子及望江南的生药学鉴定特征,可
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目的:建立胎儿染色体非整倍体(21三体、18三体和13三体)国家参考品,用于单核苷酸多态性(SNP)检测方法试剂盒的性能评价.方法:收集流产组织样本,提取样本的DNA.配制成10％、5％和3.5％等不同胎儿DNA浓度的样本,然后进行分装.选用3家单位对国家参考品进行协作标定.结果:对国家参考品104例样本进行检测,其中10％浓度阳性参考品结果均为相应染色体三体;染色体正常或其他染色体异常的国家阴性参考品,结果均不是21、18和13三体;5％浓度和3.5％浓度检测限参考品结果为相应染色体三体的检出率分别不少
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