构建沉默信息调节因子1(sirt1)过表达慢病毒载体，观察其在体外培养的视网膜神经节细胞(RGC)中的表达。

构建大鼠sirt1 cDNA的过表达慢病毒载体，采用PCR鉴定其是否构建成功。同时将其与GenBank上sirt1 cDNA标准序列进行对比分析。将鉴定后的慢病毒重组表达质粒pLV5-sirt1与包装质粒共转染293T细胞，制备携带sirt1的慢病毒pLV5-sirt1。体外培养Sprague-Dawley大鼠的RGC，应用pLV5-sirt1感染细胞设为sirt1过表达慢病毒组，同时设未感染组和空载体感染组。采用荧光显微镜观察细胞感染效率，实时PCR和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测sirt1 mRNA和蛋白表达水平。

PCR鉴定结果显示，在1680碱基对处有扩增条带，表达的DNA条带与sirt1目的片段大小一致。与GenBank上sirt1 cDNA标准序列进行对比分析，测序结果显示其含有与设计相同的靶序列。荧光显微镜观察发现，空载体感染组和sirt1过表达慢病毒组均可看到绿色荧光，感染效率在90%以上。实时PCR检测结果显示，sirt1过表达慢病毒组sirt1 mRNA表达水平较未感染组、空载体感染组均明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测结果显示，sirt1过表达慢病毒组sirt1蛋白表达水平较未感染组、空载体感染组均明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。

成功构建的大鼠sirt1过表达慢病毒载体能够在体外有效感染大鼠RGC，提高sirt1在RGC中的表达水平。