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摘要：为研究四川部分地方鸡肌苷酸（IMP）和肌内脂肪（IMF）含量变化规律，选取不同日龄（81、119、154、210日龄）泸宁鸡、米易鸡、草科鸡为试验材料，采用索氏浸提法、高效液相色谱法对IMP、IMF含量进行测定。结果显示：草科鸡与米易鸡4日龄段胸肌IMP含量以及81、119日龄腿肌IMP含量均高于泸宁鸡；米易鸡154日龄腿肌IMP含量极显著高于泸宁鸡、草科鸡（P<0.01），210日龄草科鸡腿肌IMP含量显极著高于泸宁鸡与米易鸡（P<0.01）；各日龄段草科鸡、米易鸡、泸宁鸡均表现出胸肌IMP含量显著高于腿肌；81、119、154日龄的泸宁鸡、米易鸡IMP含量随日龄的增长而增加，154日龄后则表现出增加减缓或下降的趋势，而草科鸡则从81日龄起，IMP含量表现为下降趋势。81、119、154、210日龄米易鸡的胸肌、腿肌IMF含量均显著高于泸宁鸡；81、119日龄草科鸡的胸肌、腿肌IMF含量较泸宁鸡高，154日龄的则表现为较泸宁鸡低；泸宁鸡、米易鸡、草科鸡在81、119、154、210日龄段胸肌IMF含量均极显著高于腿肌（P<0.01）；米易鸡胸腿肌IMF含量与泸宁鸡胸肌IMF含量随日龄的增长而增加；草科鸡胸肌IMF含量从81日龄起表现为随日龄的增长而下降的趋势，腿肌IMF含量则下降至154日龄后回升。综合看来，优质肉鸡中IMP总的变化趋势表现为随日龄的增长而增加，到154日龄左右时，优质肉鸡体内的IMP含量增加缓慢或开始下降，而IMF则表现为随日龄的增长而增加。以上趋势在不同鸡种间呈现出时间先后的差异，且在不同组织间的变化也不尽相同。
关键词：地方鸡种；肌苷酸；肌内脂肪
中图分类号： S831.2 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）07-0218-03
收稿日期：2014-03-17
基金项目：四川省应用基础项目（编号：2013JY0044）；四川省肉鸡现代化产业链关键技术集成研究与产业化示范项目（编号：2012NZ0037）；西南民族大学研究生创新型科研项目（编号：CX2013SZ50）；西南民族大学项目（编号：2012NFW001）。
作者简介：刘光伟（1987—），女，河南平顶山人，硕士研究生，研究方向为遗传育种。E-mail：LGWsunshine@163.com。
通信作者：徐亚欧，教授，研究方向为动物遗传资源。E-mail：xuyaou@163.com。鸡肉的肉质细嫩、鲜美，具有高蛋白、低脂肪、低热量等特点，被认为是一种健康的肉类食品，广受消费者的青睐。随着生活水平的提高，人们对鸡的肉质风味和鲜味提出了更高的要求，为此研究者对畜禽肌肉的风味物质进行了大量的研究。风味物质的研究始于20世纪50年代[1]，越来越多的研究结果表明，肌苷酸（IMP）和肌内脂肪（IMF）是影响肌肉风味和鲜味的重要物质，两者的含量因品种、部位及日龄不同存在差异。为探明四川部分地方优质鸡种IMP和IMF含量的变化规律，本试验以泸宁鸡、米易鸡、草科鸡3种四川省特有地方鸡种为研究对象，在相同饲养管理条件下，分析品种间、日龄间、部位间IMP和IMF含量的差异，以期为四川省地方鸡种肉质风味的改善和选育提供理论依据。
1材料与方法
1.1试验动物
泸宁鸡、米易鸡、草科鸡由四川省凉山州冕宁縣原生农业有限公司提供。在相同的饲养管理条件下于81、119、154、210日龄随机抽取同期出雏的泸宁鸡、米易鸡、草科鸡（各日龄段各鸡种各取16羽鸡，雌雄各半）进行屠宰。
1.2测定方法
于鸡81、119、154、210日龄时，断食12 h后称重，颈外放血屠宰，放血后取胸肌、腿肌密封于塑料袋内，于-20 ℃冷冻保存。
1.2.1IMP含量测定（1）样品处理。称取新鲜肌肉样品1.25 g，置于10 mL 塑料离心管中，分次加入6%高氯酸 4 mL，用电动匀浆器匀浆；取2 mL 6%高氯酸洗涤匀浆器，匀浆液以6 000 r/min离心10 min，取上清液于50 mL离心管中；再往沉淀中加2 mL 6%高氯酸，涡旋振荡5 min后，离心合并2次上清液；用 5.0 mol/L HCl 和0.5 mol/L NaOH 将合并液的pH值调至7，转移至25 mL容量瓶中定容摇匀；0.45 μm 滤膜过滤，用于HPLC分析[2-3]。（2）色谱条件。色谱柱：DIKMATM Platisil（铂金）ODS C18 柱（150 mm×4.6 mm），紫外检测器检测波长为254 nm，进样量10 μm。流动相的流速为11 mL/min。洗脱程序如下：0 min，100%A，0%的B；8 min，100%A，0%B；9 min，70%A，30%B；13 min，70%A，30%B。最后10 min返回到初始条件。柱温为25 ℃。
1.2.2IMF含量测定肌肉样品于测定前4 ℃解冻24 h，各取20 g放于65 ℃鼓风干燥箱干燥48 h，制成风干样；粉碎过40目筛，取样1.5 g，用SER148/6脂肪测定仪测定脂肪含量。
1.3数据处理
各组数据用Excel进行简单统计，以平均数±标准差表示。利用SPSS 18.0进行日龄、性别、品种间显著性检验。
2结果与分析
2.1IMP含量的变化
2.1.1优质肉鸡不同品种IMP含量的变化由表1可知，81日龄时，草科鸡、米易鸡胸肌IMP含量极显著高于泸宁鸡（P<0.01），草科鸡腿肌IMP含量极显著高于泸宁鸡、米易鸡（P<0.01），米易鸡腿肌IMP含量极显著高于泸宁鸡（P<001）；119日龄时，草科鸡胸肌IMP含量极显著高于泸宁鸡（P<0.01）和显著高于米易鸡（P<0.05），草科鸡、米易鸡腿肌IMP含量显著高于泸宁鸡（P<0.05）；154日龄时，泸宁鸡、米易鸡、草科鸡胸肌IMP含量间均无显著性差异，米易鸡腿肌IMP含量极显著高于泸宁鸡、草科鸡IMP含量（P<0.01）；210日龄时，米易鸡、草科鸡胸肌IMP含量极显著高于泸宁鸡（P<0.01），腿肌IMP含量无显著差异。以上结果说明不同鸡种间IMP含量存在明显差异。 2.1.2优质肉鸡肌肉不同部位IMP含量的变化由表1可知，在81、119日龄，泸宁鸡胸肌IMP含量高于腿肌IMP含量，差异极显著（P<0.01）；154、210日龄时，胸肌与腿肌间IMP含量无显著差异。81、210日龄米易鸡胸肌IMP含量高于腿肌，差异极显著（P<0.01），而119、154日龄米易鸡胸肌IMP含量略高于腿肌，但差异不显著。草科鸡各日龄段胸肌IMP含量均高于腿肌，除81日龄差异显著外（P<005），均存在极显著差异（P<0.01）。以上结果表明不同组织间的肉鸡IMP含量存在差异，且因鸡种、日龄的变化导致IMP在各组织中的蓄积各不相同。
3结论与讨论
3.1 IMP
IMP是肉质鲜味的重要成分，已成为国际上衡量肉质鲜味的一项重要指标[4-5]。本研究通过对四川3个地方优质鸡种不同日龄IMP含量进行比较，结果表明：在81、119日龄段草科鸡胸肌、腿肌IMP含量为同时期3种鸡中最高，但随日龄增长，到154、210日龄段时米易鸡IMP含量为3种鸡同时期最高，且含量差异较大。这与陈国宏等在研究不同品种鸡肌肉中IMP含量时发现品种间差异较大[2，6-7]这一结果一致。
草科鸡胸肌与腿肌IMP含量在81、119、154、210日龄段，整体呈现随日龄增长而下降的趋势，这与陈国宏等在对4～28周龄泰和乌骨鸡肌苷酸含量的研究中发现IMP随日龄增长而减少的结果[8]一致。本研究中，泸宁鸡、米易鸡胸肌和腿肌IMP含量在154日龄前呈现随日龄增长而增加的趋势，在154日龄之后则出现增加缓慢或下降趋势，与周小娟等[9]、李慧芳等[10]在对不同日龄鸡肌肉IMP含量的研究中发现肌苷酸含量随日龄增长而增加的趋势一致。推测鸡的IMP含量变化总趋势随年龄的增长而增加，到一定年龄以后保持恒定或下降，且不同品种在不同年龄段表现这种差异。
肌肉组织不同部位间IMP含量对比结果表明，米易鸡、草科鸡各日龄段胸肌IMP含量均高于腿肌内IMP含量。此结果与谢恺舟等[11]、王翠丽等[12]对家禽胸腿肌IMP含量研究结果一致。结果表明不同品种的鸡胸、腿部肌肉IMP含量存在差异，而部分鸡种在饲养到一定日龄之后，胸肌与腿肌间IMP含量差异会减小。
3.2IMF
本研究表明，除草科鸡外，米易鸡、泸宁鸡胸腿肌IMF含量均表现出随日龄的增长而增加的趋势，这一结果与周小娟等对北京油鸡和爱拔益鸡不同日龄间IMF变化趋势研究结果[9]一致。本研究中草科鸡胸肌、腿肌IMF含量从81日龄起表现为随日龄的增长而下降的趋势，该结果与Touraille等[13]、李龙等[14]在对不同日龄鸡IMF含量的研究中发现IMF含量随日龄增长而表现降低趋势一致。本研究的优质肉鸡从81日龄开始屠宰试验，测定IMP、IMF各日龄段的含量，测定结果显示81日龄时草科鸡的IMP、IMF含量均为所测定各个阶段中最高值，随日龄增长而开始下降，推测草科鸡生长发育时间比米易鸡和泸宁鸡早，这一结果还有待于进一步研究。
本研究对3个鸡种不同部位间IMF含量的对比结果表明，不同饲养期泸宁鸡、米易鸡、草科鸡腿肌IMF含量均高于胸肌，此研究结果与任文仕等[7]、吴琼等[15]等学者报道的结果一致。结果表明IMF含量在不同部位间存在差异。
综上所述，优质肉鸡中IMP含量总的变化趋势是随日龄的增长而增加，到154日龄左右优质肉鸡体内IMP含量增加缓慢或开始下降，而IMF含量的变化则表现为随日龄的增长而增加。上述趋势在不同鸡种间呈现出时间先后的差异，且不同组织间的变化也不尽相同。这些结果对于今后从育种角度开发利用地方优质鸡种资源有重要意义。
参考文献：
[1]罗桂芬，孙世铎，陈继兰，等. 肉类风味物质：肌苷酸[J]. 中国家禽，2004，26（3）：41-43.
[2]陈国宏，侯水生，吴信生，等. 中国部分地方鸡肌肉肌苷酸含量研究[J]. 畜牧獸医学报，2000，31（3）：211-215.
[3]王 海，徐亚欧，王康环，等. HPLC法测定家禽肌肉中IMP的含量[J]. 西南民族大学学报：自然科学版，2013，39（5）：667-670.
[4]Suzuki A，Homma N，Fukuda A，et al. Effects of high pressure treatment on the flavour-related components in meat[J]. Meat Science，1994，37（3）：369-379.
[5]Fuijmura S. Identification of taste-active components in the meat of the Japanese native chicken，Hinaidori and broilers，and the effect of feeding treatments on taste-active components[J]. Animal Food Sci，1998，50（2）：99-158.
[6]陈锐，霍科科，张涛，等. 略阳乌鸡与良凤花鸡肌肉肌苷酸含量比较[J]. 江苏农业科学，2013，41（8）：195-197.
[7]任文仕，朱庆，杨琴，等. 不同品系鸡肌内脂肪和肌苷酸含量比较分析[J]. 中国畜牧兽医，2011，38（6）：230-232.
[8]陈国宏，李慧芳，吴信生，等. 泰和乌骨鸡肌肉肌苷酸含量变化规律及其遗传力估测[J]. 扬州大学学报：农业与生命科学版，2002，23（2）：29-32.
[9]周小娟，朱年华，张日俊. 品种、日龄及饲养方式对鸡肉肌苷酸和肌内脂肪含量的影响[J]. 动物营养学报，2010，22（5）：1251-1256.
[10]李慧芳，陈宽维. 不同鸡种肌肉肌苷酸和脂肪酸含量的比较[J]. 扬州大学学报：农业与生命科学版，2004，25（3）：9-11，32.
[11]谢恺舟，李爱华，孙瑛瑛，等. 京海黄鸡及其杂交配套组合肌肉中肌苷酸和肌内脂肪沉积规律的研究[J]. 农业科学与技术，2013，14（1）：144-148，154.
[12]王翠丽，柏雪，邱翔，等. 乌骨鸡肉中氨基酸组成和肌苷酸含量的分析[J]. 西南民族大学学报：自然科学版，2011，37（1）：90-92.
[13]Touraille C，Kopp J，Valin C，et al. Chicken meat quality.1.Influence of age and growth-rate on physicochemical and sensory characteristics of the meat[J]. Archiv fur Geflugelkunde，1981，45（2）：69-76.
[14]李龙，王宏辉，刘锁珠，等. 不同饲养方式对藏鸡生产性能和脂肪沉积的影响[J]. 畜牧与饲料科学，2011（7）：2-3.
[15]吴琼，杨福合，邢秀梅. 中国环颈雉与其它禽类肌肉肌内脂肪含量比较分析[J]. 特产研究，2012（4）：1-3.
关键词：地方鸡种；肌苷酸；肌内脂肪
中图分类号： S831.2 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）07-0218-03
收稿日期：2014-03-17
基金项目：四川省应用基础项目（编号：2013JY0044）；四川省肉鸡现代化产业链关键技术集成研究与产业化示范项目（编号：2012NZ0037）；西南民族大学研究生创新型科研项目（编号：CX2013SZ50）；西南民族大学项目（编号：2012NFW001）。
作者简介：刘光伟（1987—），女，河南平顶山人，硕士研究生，研究方向为遗传育种。E-mail：LGWsunshine@163.com。
通信作者：徐亚欧，教授，研究方向为动物遗传资源。E-mail：xuyaou@163.com。鸡肉的肉质细嫩、鲜美，具有高蛋白、低脂肪、低热量等特点，被认为是一种健康的肉类食品，广受消费者的青睐。随着生活水平的提高，人们对鸡的肉质风味和鲜味提出了更高的要求，为此研究者对畜禽肌肉的风味物质进行了大量的研究。风味物质的研究始于20世纪50年代[1]，越来越多的研究结果表明，肌苷酸（IMP）和肌内脂肪（IMF）是影响肌肉风味和鲜味的重要物质，两者的含量因品种、部位及日龄不同存在差异。为探明四川部分地方优质鸡种IMP和IMF含量的变化规律，本试验以泸宁鸡、米易鸡、草科鸡3种四川省特有地方鸡种为研究对象，在相同饲养管理条件下，分析品种间、日龄间、部位间IMP和IMF含量的差异，以期为四川省地方鸡种肉质风味的改善和选育提供理论依据。
1材料与方法
1.1试验动物
泸宁鸡、米易鸡、草科鸡由四川省凉山州冕宁縣原生农业有限公司提供。在相同的饲养管理条件下于81、119、154、210日龄随机抽取同期出雏的泸宁鸡、米易鸡、草科鸡（各日龄段各鸡种各取16羽鸡，雌雄各半）进行屠宰。
1.2测定方法
于鸡81、119、154、210日龄时，断食12 h后称重，颈外放血屠宰，放血后取胸肌、腿肌密封于塑料袋内，于-20 ℃冷冻保存。
1.2.1IMP含量测定（1）样品处理。称取新鲜肌肉样品1.25 g，置于10 mL 塑料离心管中，分次加入6%高氯酸 4 mL，用电动匀浆器匀浆；取2 mL 6%高氯酸洗涤匀浆器，匀浆液以6 000 r/min离心10 min，取上清液于50 mL离心管中；再往沉淀中加2 mL 6%高氯酸，涡旋振荡5 min后，离心合并2次上清液；用 5.0 mol/L HCl 和0.5 mol/L NaOH 将合并液的pH值调至7，转移至25 mL容量瓶中定容摇匀；0.45 μm 滤膜过滤，用于HPLC分析[2-3]。（2）色谱条件。色谱柱：DIKMATM Platisil（铂金）ODS C18 柱（150 mm×4.6 mm），紫外检测器检测波长为254 nm，进样量10 μm。流动相的流速为11 mL/min。洗脱程序如下：0 min，100%A，0%的B；8 min，100%A，0%B；9 min，70%A，30%B；13 min，70%A，30%B。最后10 min返回到初始条件。柱温为25 ℃。
1.2.2IMF含量测定肌肉样品于测定前4 ℃解冻24 h，各取20 g放于65 ℃鼓风干燥箱干燥48 h，制成风干样；粉碎过40目筛，取样1.5 g，用SER148/6脂肪测定仪测定脂肪含量。
1.3数据处理
各组数据用Excel进行简单统计，以平均数±标准差表示。利用SPSS 18.0进行日龄、性别、品种间显著性检验。
2结果与分析
2.1IMP含量的变化
2.1.1优质肉鸡不同品种IMP含量的变化由表1可知，81日龄时，草科鸡、米易鸡胸肌IMP含量极显著高于泸宁鸡（P<0.01），草科鸡腿肌IMP含量极显著高于泸宁鸡、米易鸡（P<0.01），米易鸡腿肌IMP含量极显著高于泸宁鸡（P<001）；119日龄时，草科鸡胸肌IMP含量极显著高于泸宁鸡（P<0.01）和显著高于米易鸡（P<0.05），草科鸡、米易鸡腿肌IMP含量显著高于泸宁鸡（P<0.05）；154日龄时，泸宁鸡、米易鸡、草科鸡胸肌IMP含量间均无显著性差异，米易鸡腿肌IMP含量极显著高于泸宁鸡、草科鸡IMP含量（P<0.01）；210日龄时，米易鸡、草科鸡胸肌IMP含量极显著高于泸宁鸡（P<0.01），腿肌IMP含量无显著差异。以上结果说明不同鸡种间IMP含量存在明显差异。 2.1.2优质肉鸡肌肉不同部位IMP含量的变化由表1可知，在81、119日龄，泸宁鸡胸肌IMP含量高于腿肌IMP含量，差异极显著（P<0.01）；154、210日龄时，胸肌与腿肌间IMP含量无显著差异。81、210日龄米易鸡胸肌IMP含量高于腿肌，差异极显著（P<0.01），而119、154日龄米易鸡胸肌IMP含量略高于腿肌，但差异不显著。草科鸡各日龄段胸肌IMP含量均高于腿肌，除81日龄差异显著外（P<005），均存在极显著差异（P<0.01）。以上结果表明不同组织间的肉鸡IMP含量存在差异，且因鸡种、日龄的变化导致IMP在各组织中的蓄积各不相同。
3结论与讨论
3.1 IMP
IMP是肉质鲜味的重要成分，已成为国际上衡量肉质鲜味的一项重要指标[4-5]。本研究通过对四川3个地方优质鸡种不同日龄IMP含量进行比较，结果表明：在81、119日龄段草科鸡胸肌、腿肌IMP含量为同时期3种鸡中最高，但随日龄增长，到154、210日龄段时米易鸡IMP含量为3种鸡同时期最高，且含量差异较大。这与陈国宏等在研究不同品种鸡肌肉中IMP含量时发现品种间差异较大[2，6-7]这一结果一致。
草科鸡胸肌与腿肌IMP含量在81、119、154、210日龄段，整体呈现随日龄增长而下降的趋势，这与陈国宏等在对4～28周龄泰和乌骨鸡肌苷酸含量的研究中发现IMP随日龄增长而减少的结果[8]一致。本研究中，泸宁鸡、米易鸡胸肌和腿肌IMP含量在154日龄前呈现随日龄增长而增加的趋势，在154日龄之后则出现增加缓慢或下降趋势，与周小娟等[9]、李慧芳等[10]在对不同日龄鸡肌肉IMP含量的研究中发现肌苷酸含量随日龄增长而增加的趋势一致。推测鸡的IMP含量变化总趋势随年龄的增长而增加，到一定年龄以后保持恒定或下降，且不同品种在不同年龄段表现这种差异。
肌肉组织不同部位间IMP含量对比结果表明，米易鸡、草科鸡各日龄段胸肌IMP含量均高于腿肌内IMP含量。此结果与谢恺舟等[11]、王翠丽等[12]对家禽胸腿肌IMP含量研究结果一致。结果表明不同品种的鸡胸、腿部肌肉IMP含量存在差异，而部分鸡种在饲养到一定日龄之后，胸肌与腿肌间IMP含量差异会减小。
3.2IMF
本研究表明，除草科鸡外，米易鸡、泸宁鸡胸腿肌IMF含量均表现出随日龄的增长而增加的趋势，这一结果与周小娟等对北京油鸡和爱拔益鸡不同日龄间IMF变化趋势研究结果[9]一致。本研究中草科鸡胸肌、腿肌IMF含量从81日龄起表现为随日龄的增长而下降的趋势，该结果与Touraille等[13]、李龙等[14]在对不同日龄鸡IMF含量的研究中发现IMF含量随日龄增长而表现降低趋势一致。本研究的优质肉鸡从81日龄开始屠宰试验，测定IMP、IMF各日龄段的含量，测定结果显示81日龄时草科鸡的IMP、IMF含量均为所测定各个阶段中最高值，随日龄增长而开始下降，推测草科鸡生长发育时间比米易鸡和泸宁鸡早，这一结果还有待于进一步研究。
本研究对3个鸡种不同部位间IMF含量的对比结果表明，不同饲养期泸宁鸡、米易鸡、草科鸡腿肌IMF含量均高于胸肌，此研究结果与任文仕等[7]、吴琼等[15]等学者报道的结果一致。结果表明IMF含量在不同部位间存在差异。
综上所述，优质肉鸡中IMP含量总的变化趋势是随日龄的增长而增加，到154日龄左右优质肉鸡体内IMP含量增加缓慢或开始下降，而IMF含量的变化则表现为随日龄的增长而增加。上述趋势在不同鸡种间呈现出时间先后的差异，且不同组织间的变化也不尽相同。这些结果对于今后从育种角度开发利用地方优质鸡种资源有重要意义。
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[5]Fuijmura S. Identification of taste-active components in the meat of the Japanese native chicken，Hinaidori and broilers，and the effect of feeding treatments on taste-active components[J]. Animal Food Sci，1998，50（2）：99-158.
[6]陈锐，霍科科，张涛，等. 略阳乌鸡与良凤花鸡肌肉肌苷酸含量比较[J]. 江苏农业科学，2013，41（8）：195-197.
[7]任文仕，朱庆，杨琴，等. 不同品系鸡肌内脂肪和肌苷酸含量比较分析[J]. 中国畜牧兽医，2011，38（6）：230-232.
[8]陈国宏，李慧芳，吴信生，等. 泰和乌骨鸡肌肉肌苷酸含量变化规律及其遗传力估测[J]. 扬州大学学报：农业与生命科学版，2002，23（2）：29-32.
[9]周小娟，朱年华，张日俊. 品种、日龄及饲养方式对鸡肉肌苷酸和肌内脂肪含量的影响[J]. 动物营养学报，2010，22（5）：1251-1256.
[10]李慧芳，陈宽维. 不同鸡种肌肉肌苷酸和脂肪酸含量的比较[J]. 扬州大学学报：农业与生命科学版，2004，25（3）：9-11，32.
[11]谢恺舟，李爱华，孙瑛瑛，等. 京海黄鸡及其杂交配套组合肌肉中肌苷酸和肌内脂肪沉积规律的研究[J]. 农业科学与技术，2013，14（1）：144-148，154.
[12]王翠丽，柏雪，邱翔，等. 乌骨鸡肉中氨基酸组成和肌苷酸含量的分析[J]. 西南民族大学学报：自然科学版，2011，37（1）：90-92.
[13]Touraille C，Kopp J，Valin C，et al. Chicken meat quality.1.Influence of age and growth-rate on physicochemical and sensory characteristics of the meat[J]. Archiv fur Geflugelkunde，1981，45（2）：69-76.
[14]李龙，王宏辉，刘锁珠，等. 不同饲养方式对藏鸡生产性能和脂肪沉积的影响[J]. 畜牧与饲料科学，2011（7）：2-3.
[15]吴琼，杨福合，邢秀梅. 中国环颈雉与其它禽类肌肉肌内脂肪含量比较分析[J]. 特产研究，2012（4）：1-3.