【摘 要】
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目的 环状RNA Hsa-circ-0026352(circNR4A1)在乳腺癌患者组织、外周血、细胞系中的相对表达及其对细胞增殖、凋亡的影响.方法 通过人circRNA芯片筛选在乳腺癌组织及癌旁组织
【机 构】
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宁夏医科大学总医院生物芯片北京国家工程研究中心宁夏分中心;宁夏医科大学临床医学院,宁夏银川750004;银川市疾病预防控制中心微生物检验科,宁夏银川750011
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目的 环状RNA Hsa-circ-0026352(circNR4A1)在乳腺癌患者组织、外周血、细胞系中的相对表达及其对细胞增殖、凋亡的影响.方法 通过人circRNA芯片筛选在乳腺癌组织及癌旁组织中差异表达的circRNA,通过实时定量PCR验证circNR4A1在15对乳腺癌组织及癌旁正常组织、40例患者及40例健康人群外周血以及MCF-7、HCC-1937、MDA-MB-231、T-47D人乳腺癌细胞及MCF-10A人乳腺上皮细胞的表达.使用circPrimer 1.2软件绘制circRNA结构图,使用环状RNA交互作用组(Circular RNA interactome)数据库预测circRNA结合的miRNA和RNA-蛋白结合位点,通过京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库进行circRNA生物学功能预测.构建circNR4A1过表达载体并转染MCF-7细胞,采用CCK-8法和克隆形成实验检测乳腺癌细胞增殖、Hoechst33258染色结合流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期,实时定量PCR检测癌细胞丝裂原激活蛋白激酶激酶/细胞外信号调节激酶(MEK/ERK)信号通路因子K-RAS、MEK、ERK,凋亡相关基因B细胞白血病/淋巴瘤因子2(Bc12)、B细胞白血病/淋巴瘤因子2关联凋亡因子X(BAX)、B细胞白血病/淋巴瘤因子2细胞死亡激活子(BAD)、胱天蛋白酶3(caspase-3)等mRNA水平,Western blot法检测MEK、ERK、Bcl2、BAD、caspase-3蛋白水平.结果 circNR4A1(Hsa-circ-0026352)在乳腺癌组织、外周血、乳腺癌细胞系中表达显著低于癌旁组织、健康人群外周血、人乳腺上皮细胞.在MCF-7细胞中过表达circNR4A1能够抑制癌细胞增殖,促进细胞凋亡,阻滞细胞周期于G1/S期,并抑制MEK、ERK、Bc12蛋白表达,促进BAD、caspase-3蛋白表达.结论 circNR4A1/Hsa-circ-0026352在乳腺癌细胞中低表达,过表达circNR4A1能够显著抑制MCF-7细胞增殖,诱导细胞凋亡.
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