【摘 要】
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为了提高角蛋白酶在大肠杆菌中的胞外表达量并了解其酶学性质,从一株具有羽毛降解能力的地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis BBE11-1)中克隆获得全长为1 140 bp的角蛋白酶
【机 构】
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江南大学工业生物技术教育部重点实验室; 江南大学生物工程学院; 江南大学糖化学与生物技术教育部重点实验室; 江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(30900013);国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2011AA100905,2011AA100901);国家“十二五”关键技术研究发展计划项目(2011BAK10B03);教育部长江学者和创新团队发展计划项目(IRT1135)资助~~
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为了提高角蛋白酶在大肠杆菌中的胞外表达量并了解其酶学性质,从一株具有羽毛降解能力的地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis BBE11-1)中克隆获得全长为1 140 bp的角蛋白酶基因ker,将去掉自身信号肽全长为1 053 bp的ker基因与质粒pET-22b(+)进行连接并转化到大肠杆菌BL21宿主中获得重组菌株.此后,采用疏水苯基层析柱对所表达的角蛋白酶进行纯化,获得分子量(Mr)大小约32×103的重组角蛋白酶.酶学性质研究表明,该重组角蛋白酶最适温度为50℃,最适pH值为10,属于丝氨酸蛋白酶,金属离子Mg2+和K+对酶活力有促进作用,而Mn2+对其有抑制作用.经优化后,该酶胞外酶活在诱导温度20℃、IPTG 0.05 mmol/L、甘氨酸浓度150 mmol/L以及酵母粉浓度60 g/L的条件下可达460.2 U/mL.研究表明,优化培养条件可以较好地提高角蛋白酶在大肠杆菌中的表达量,结果为利用基因工程菌生产角蛋白酶奠定了基础.图4表1参22
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