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摘要：目的 探究使用金标法测量严重急性呼吸综合征冠状病毒2 （SARS-CoV-2）血清抗-SARS-CoV-2 IgM和IgG 抗体的有效性。方法 检测了26例2019冠状病毒病（COVID-19） PCR阳性患者、53例2019冠状病毒病疑似但PCR阴性患者以及20例和100例随机抽取的非2019冠状病毒病患者血清中抗SARS-CoV-2 IgM和IgG滴度。结果 该检测系统能够成功检测SARS-CoV-2 IgM/IgG。在对111份已知含有自身抗体的血清样本进行评估时，我们观察到IgM检测有4例假阳性，IgG检测无假阳性。抗体检测与PCR检测的符合率分别为98.1%和100%，PCR检测阴性病例SARS-CoV-2 IgM和IgG符合率分别为30.8%和73.1%。结论 该方法可用于SARS-CoV-2病毒N蛋白和S蛋白抗体的自动检测，且可用于实验室检测。
关键词：新型化学发光法;IgM和IgG;N和S蛋白
【中图分类号】Q511 【文献标识码】A 【文章编号】1673-9026（2021）06-143-01
2019年12月，中国武汉发现首例由未知微生物引起的肺炎病例。目前，COVID-19的诊断依据为患者的临床表现，并通过实时逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）在呼吸道标本，如鼻拭子或痰中检测SARS-CoV-2 RNA。与PCR检测相比，该血清学检测方法周转时间更快，采集样本更容易、更安全，技术人员的专业技能更低[1];此外，当我们根据COVID-19发病后的时间来解释抗体检测结果时，该检测将为我们诊断COVID-19提供重要信息。抗体测试的主要问题是假阳性病例的高频率。因此，本研究旨在验证血清SARS-CoV-2 IgM和IgG抗体的检测方法，并探讨该方法在COVID-19诊断中的应用价值。
1 材料与方法
1.1 患者资料
收集COVID-19阳性病例26例和COVID-19疑似病例53例。COVID-19确诊病例是根据中国新冠的指南诊断。随机选取2020年3月或2017年1～12月在我院就诊且无自身免疫性疾病的门诊患者20例和100例作为对照组。
1.2 抗体检测
抗体检测采用SARS-CoV-2 IgM和IgG金标法免疫分析试剂盒和iFlash3000全自动分析仪。将SARS-CoV的核衣壳蛋白[N蛋白]和刺突蛋白[S蛋白]包覆在磁珠上。用吖啶标记的抗人IgM或IgG偶联抗体检测结合到珠子上的抗体。SARS-CoV-2 IgM/IgG阳性的临界值为10AU/mL。如果SARS-CoV-2 IgG滴度大于40 AU/mL，则用无反应血清稀释后再次测定抗体滴度。为了与已建立的抗SARS-CoV-2抗体测试相比较，使用罗氏公司（Roche）的抗SARS-CoV-2电化学发光免疫分析（ECLIA）试剂盒，测量了从COVID-19阳性或疑似患者收集的385份血清样本
1.3 统计学方法
使用SPSS 22.0统计软件包进行数据分析。计量数据以均数±标准差（）表示，使用t检验进行分析。计数数据以百分比（%）或例数（n）表示，使用2检验进行分析，P<0.05认为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 抗体检测的准确度和精度
金标法检测的SARS-CoV-2 IgM范围在1.90%～2.13%，精度从2.48%降至4.08%的，重复性SARS-CoV-2免疫球蛋白范围从1.03%到1.65%，精度从1.87%到2.17%。实验室内SARS-CoV-2 IgG的精密度为3.12 ～ 5.13%。
2.2 SARS-CoV-2抗体检测能力
为评价SARS-CoV-2 IgM/IgG的检测能力，我们测定了LoB和LoD。SARS-CoV-2 IgM检测的LoD为0.74 AU/mL，LoB为0.63 AU/mL。SARS-CoV-2 IgG抗体120次测定的LoD为0.53 AU/mL， LoB为0.47 AU/mL。我们检测了7份SARS-CoV-2 IgM抗体水平较低的样本和10份SARS-CoV-2 IgG样本。在两种检测中，低于LoD的样品的CV均不超过10%。因此，SARS-CoV-2 IgM檢测限为0.74 AU/mL， SARS-CoV-2 IgG检测限为0.53 AU/mL。
3 讨论
金标法是一种较为先进的体外诊断手段，其具有较高的灵敏性与特异性，操作简便、快捷，检测准确率较高[2]。其只根据特制的检验盒于较短时间内就可以获得检测结果，主要操作步骤为抽血以后滴在试纸上，放置20 min后对此试纸是否有颜色变化予以认真观察，倘若存在颜色变化，初步检测为阳性。此种检测方法在医院或多数患者均较适用，具有操作方便、快捷的特点，检测结果快速、准确。酶联法就是按照酶免疫测定原理改良的新型技术，其主要分为双抗原夹心法、间接法以及抗体竞争法三类。现阶段，国内与国外通常采用第3代双抗原夹心法试剂。主要检测流程为：将加入酶反应的底物后，底物受到酶催化转变为有色产物，产物和标本中受检物质的量具有密切联系，因此，可以按照颜色反应深浅予以刊物定性或定量分析。因为酶催化频率相对较高，因此，可使反应效果显著放大，进而促使检测方法的敏感度明显提高 [3]。金标法的反应速度较快，不需要采用特殊的仪器与花费大量时间获得检测结果。利用金标法能够将急诊中遇到的此种情况有效解决，使治疗医师对患者的病情充分掌握。
总之，我们已经验证了一种使用CLIA试剂盒检测SARS-CoV-2 IgM和IgG的测量系统，并观察到该系统具有足够的诊断性能用于临床实验室检测。
参考文献：
[1] Lu R， Zhao X， Li J， et al. Genomic characterisation and epidemiology of 2019 novel coronavirus： implications for virus origins and receptor binding. Lancet. 2020; 395： 565-574.
[2] Zhu N， Zhang D， Wang W， et al. A novel coronavirus from patients with pneumonia in China， 2019. N Engl J Med. 2020; 382： 727-733.
[3] Guan W， Ni Z， Hu Y， et al. Clinical Characteristics of Coronavirus Disease 2019 in China. N Engl J Med. 2020; 382： 1708-1720.
第一作者简介：李胜涛，性别：男;出生年月1978.11，籍贯：湖南郴州;民族：汉;职称：副主任技师;学历：硕士研究生;研究方向：检验
通讯作者简介：徐玉娟，性别：女;出生年月1986.07，籍贯：湖南郴州;民族：汉;职称：主管技师;学历：硕士研究生;研究方向：检验
郴州市第一人民医院检验医学中心 湖南郴州 423000
基金：级别：郴州市科学技术局基金
编号：ZDF2020017
名称：COVID-19 IgG-IgM抗体快速联合检测试剂条的研究
关键词：新型化学发光法;IgM和IgG;N和S蛋白
【中图分类号】Q511 【文献标识码】A 【文章编号】1673-9026（2021）06-143-01
2019年12月，中国武汉发现首例由未知微生物引起的肺炎病例。目前，COVID-19的诊断依据为患者的临床表现，并通过实时逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）在呼吸道标本，如鼻拭子或痰中检测SARS-CoV-2 RNA。与PCR检测相比，该血清学检测方法周转时间更快，采集样本更容易、更安全，技术人员的专业技能更低[1];此外，当我们根据COVID-19发病后的时间来解释抗体检测结果时，该检测将为我们诊断COVID-19提供重要信息。抗体测试的主要问题是假阳性病例的高频率。因此，本研究旨在验证血清SARS-CoV-2 IgM和IgG抗体的检测方法，并探讨该方法在COVID-19诊断中的应用价值。
1 材料与方法
1.1 患者资料
收集COVID-19阳性病例26例和COVID-19疑似病例53例。COVID-19确诊病例是根据中国新冠的指南诊断。随机选取2020年3月或2017年1～12月在我院就诊且无自身免疫性疾病的门诊患者20例和100例作为对照组。
1.2 抗体检测
抗体检测采用SARS-CoV-2 IgM和IgG金标法免疫分析试剂盒和iFlash3000全自动分析仪。将SARS-CoV的核衣壳蛋白[N蛋白]和刺突蛋白[S蛋白]包覆在磁珠上。用吖啶标记的抗人IgM或IgG偶联抗体检测结合到珠子上的抗体。SARS-CoV-2 IgM/IgG阳性的临界值为10AU/mL。如果SARS-CoV-2 IgG滴度大于40 AU/mL，则用无反应血清稀释后再次测定抗体滴度。为了与已建立的抗SARS-CoV-2抗体测试相比较，使用罗氏公司（Roche）的抗SARS-CoV-2电化学发光免疫分析（ECLIA）试剂盒，测量了从COVID-19阳性或疑似患者收集的385份血清样本
1.3 统计学方法
使用SPSS 22.0统计软件包进行数据分析。计量数据以均数±标准差（）表示，使用t检验进行分析。计数数据以百分比（%）或例数（n）表示，使用2检验进行分析，P<0.05认为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 抗体检测的准确度和精度
金标法检测的SARS-CoV-2 IgM范围在1.90%～2.13%，精度从2.48%降至4.08%的，重复性SARS-CoV-2免疫球蛋白范围从1.03%到1.65%，精度从1.87%到2.17%。实验室内SARS-CoV-2 IgG的精密度为3.12 ～ 5.13%。
2.2 SARS-CoV-2抗体检测能力
为评价SARS-CoV-2 IgM/IgG的检测能力，我们测定了LoB和LoD。SARS-CoV-2 IgM检测的LoD为0.74 AU/mL，LoB为0.63 AU/mL。SARS-CoV-2 IgG抗体120次测定的LoD为0.53 AU/mL， LoB为0.47 AU/mL。我们检测了7份SARS-CoV-2 IgM抗体水平较低的样本和10份SARS-CoV-2 IgG样本。在两种检测中，低于LoD的样品的CV均不超过10%。因此，SARS-CoV-2 IgM檢测限为0.74 AU/mL， SARS-CoV-2 IgG检测限为0.53 AU/mL。
3 讨论
金标法是一种较为先进的体外诊断手段，其具有较高的灵敏性与特异性，操作简便、快捷，检测准确率较高[2]。其只根据特制的检验盒于较短时间内就可以获得检测结果，主要操作步骤为抽血以后滴在试纸上，放置20 min后对此试纸是否有颜色变化予以认真观察，倘若存在颜色变化，初步检测为阳性。此种检测方法在医院或多数患者均较适用，具有操作方便、快捷的特点，检测结果快速、准确。酶联法就是按照酶免疫测定原理改良的新型技术，其主要分为双抗原夹心法、间接法以及抗体竞争法三类。现阶段，国内与国外通常采用第3代双抗原夹心法试剂。主要检测流程为：将加入酶反应的底物后，底物受到酶催化转变为有色产物，产物和标本中受检物质的量具有密切联系，因此，可以按照颜色反应深浅予以刊物定性或定量分析。因为酶催化频率相对较高，因此，可使反应效果显著放大，进而促使检测方法的敏感度明显提高 [3]。金标法的反应速度较快，不需要采用特殊的仪器与花费大量时间获得检测结果。利用金标法能够将急诊中遇到的此种情况有效解决，使治疗医师对患者的病情充分掌握。
总之，我们已经验证了一种使用CLIA试剂盒检测SARS-CoV-2 IgM和IgG的测量系统，并观察到该系统具有足够的诊断性能用于临床实验室检测。
参考文献：
[1] Lu R， Zhao X， Li J， et al. Genomic characterisation and epidemiology of 2019 novel coronavirus： implications for virus origins and receptor binding. Lancet. 2020; 395： 565-574.
[2] Zhu N， Zhang D， Wang W， et al. A novel coronavirus from patients with pneumonia in China， 2019. N Engl J Med. 2020; 382： 727-733.
[3] Guan W， Ni Z， Hu Y， et al. Clinical Characteristics of Coronavirus Disease 2019 in China. N Engl J Med. 2020; 382： 1708-1720.
第一作者简介：李胜涛，性别：男;出生年月1978.11，籍贯：湖南郴州;民族：汉;职称：副主任技师;学历：硕士研究生;研究方向：检验
通讯作者简介：徐玉娟，性别：女;出生年月1986.07，籍贯：湖南郴州;民族：汉;职称：主管技师;学历：硕士研究生;研究方向：检验
郴州市第一人民医院检验医学中心 湖南郴州 423000
基金：级别：郴州市科学技术局基金
编号：ZDF2020017
名称：COVID-19 IgG-IgM抗体快速联合检测试剂条的研究