【摘 要】
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目的 应用“自组装”培养技术联合生长分化因子5( GDF-5)体外构建工程化软骨,比较裸鼠体内植入前后软骨相关生物学特性的差异.方法 密度梯度离心法分离培养成人骨髓间充质干细胞(hMSCs).将第3代hMSCs用含GDF-5的软骨诱导液定向诱导培养,诱导3周后重悬细胞,以5×106个/ml的细胞终质量浓度接种于2％琼脂糖包被的24孔板,行自组装培养,体外培养6周后部分标本植入裸鼠皮下,再经体内6周
【机 构】
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430022武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科,430022武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科,430022武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科,430022武汉,华中科技
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目的 应用“自组装”培养技术联合生长分化因子5( GDF-5)体外构建工程化软骨,比较裸鼠体内植入前后软骨相关生物学特性的差异.方法 密度梯度离心法分离培养成人骨髓间充质干细胞(hMSCs).将第3代hMSCs用含GDF-5的软骨诱导液定向诱导培养,诱导3周后重悬细胞,以5×106个/ml的细胞终质量浓度接种于2％琼脂糖包被的24孔板,行自组装培养,体外培养6周后部分标本植入裸鼠皮下,再经体内6周后取材.通过大体观察、组织学、免疫组织化学、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、生物化学和生物力学检测等方法对体内植入前后标本的软骨相关生物学特性进行比较.结果 体外培养6周时预分化的hMSCs“自组装”形成了软骨样组织,但质地较软,弹性较差.体内植入6周后,“自组装”工程化软骨能维持良好的软骨外观.体外标本的糖胺聚糖(GAG)含量为(6.32 ±0.47) μg/mg,弹性模量为(5.40±0.64) MPa,分别仅是体内标本的69.8％和26.1％.组织学染色显示体内标本的异染基质及Ⅱ型胶原显色程度均明显强于体外标本,RT-PCR结果也反映出这一变化.结论 应用“自组装”技术联合GDF-5构建的工程化软骨在裸鼠体内皮下环境中能维持良好的软骨特性,并且体内环境能促进其生物学改建及进一步发育成熟。
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