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利用重叠延伸PCR扩增技术，体外获得大肠杆菌不耐热肠毒素（LT）突变体LTK63、LTR72和LTG192全基因片段，酶切和测序结果表明构建的表达载体pET30a-LT、pET30a-LTK63、pET30a-LTR72、pET30a-LTG192阅读框架正确，且相应位点氨基酸获得了替换。诱导表达产物用SDS-PAGE检测，野生型LT蛋白及3个突变体均表达出约33．0Ku和13．0Ku的2个蛋白带，与LTA、LTB亚基分子量大小相吻合；Westernblot检测，2个蛋白带均可与抗His抗体发生特异性免疫