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摘 要：头孢美唑钠无菌检查时可采用薄膜过滤法消除抑菌性，缓冲液冲洗量以900ml/筒为宜，可以选择大肠埃希菌或金黄色葡萄球菌为阳性对照菌。本实验对头孢美唑钠无菌检查消除抑菌性进行研究。
关键词：头孢美唑钠；检查；验证
头孢美唑钠又称氰唑甲氧头孢菌素、头孢美他唑、先锋密林、头孢甲氧氰唑，为第二代头孢菌素，对大肠杆菌、克雷伯肺炎杆菌、奇异变形杆菌、沙门菌属等阴性杆菌对本品有较好的敏感性[1-5]。头孢美唑钠适用于敏感菌引起的败血症、支气管炎、胆管炎、胆囊炎、腹膜炎、支气管扩张症感染时、肺炎、慢性呼吸道疾患继发感染、肺化脓症（肺脓肿）、前庭大腺炎、子宫内感染、子宫附件炎、盆腔死腔炎、颌炎等。无菌检查法系指检查药品、敷料、缝合线、无菌器具及适用于药典要求无菌检查的其他品种是否无菌的一种方法。本实验对头孢美唑钠无菌检查消除抑菌性进行研究。
1 试验环境与材料
1.1 试验环境：在环境洁净度为B+A的无菌室中进行。
1.2 仪器：BOD生化培养箱（上海仙象仪器仪表有限公司）；赛多利斯BT25S分析天平（北京晨曦勇创科技有限公司）；全封闭集菌培养器（一次性）（浙江泰林生物技术股份有限公司）；细菌培养箱（上海仙象仪器仪表有限公司）；HTY-2000B智能集菌仪（杭州泰林生物技术设备有限公司）；YX-24LM不锈钢压力蒸汽灭菌器消毒锅24L升（河南三强医疗器械有限公司）；KQ250DE超声波清洗器超声波检测仪器（烟台鑫康商贸有限公司）。
1.3 试验用菌株：生孢梭菌[CMCC（B）64 941]、金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003、枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501]、白色念珠菌[CMCC（B）98 001]、黑曲霉[CMCC（B）98 003、大肠埃希菌ECMCC （B）44lO23。
1.4 培养基、稀释液及缓冲液
1.4.1 干粉培养基：玫瑰红钠琼脂培养基（连云港端峰生物科技有限公司）、改良马丁琼脂培养基（天津市津东天正精细化学试剂厂）、硫乙醇酸盐培养基（连云港端峰生物科技有限公司）、营养琼脂培养基（连云港端峰生物科技有限公司）。
1.4.2 细菌稀释液：氯化钠溶液（天津市津东天正精细化学试剂厂）。
1.4.3 冲洗用缓冲液：蛋白胨缓冲液（连云港端峰生物科技有限公司）。
2 方法与结果
2.1 菌液制备
2.1.1 取经培养一天的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌的肉汤培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-5～10-7，备用。
2.1.2 取经培养一天的生孢梭菌硫乙醇酸盐流体培养基的新鲜培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-7备用。
2.1.3 取经培养一天的白色念珠菌液体培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-5～10-6，备用。
2.1.4 取经培养一周的黑曲霉斜面培养物，加3～5ml 0.9%无菌氯化钠溶液，洗下黑曲霉孢子，吸取出孢子悬液1ml，加0.9%无菌氯化钠溶液适量稀释，用标准比浊管比浊，其浊度与标准比浊管相当后，取1ml稀释后的孢子悬液，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-4，备用。
2.2 菌液计数
每种菌液接种2个平皿，取其平均值。取白色念珠菌、黑曲霉菌菌液各1ml，注入约15毫升、45摄氏度改良马丁琼脂平皿，经26摄氏度生化培养箱培养72小时，金黄色葡萄球菌液、枯草芽孢杆菌液、生孢梭菌液、大肠埃希菌液各1 ml，注入约15 毫升、45摄氏度营养琼脂平皿，经36摄氏度生化培养箱培养48小时，活菌计数。生孢梭菌[CMCC（B）64 941]菌落数69cfu/ml，大肠埃希菌ECMCC （B）44lO23菌落数82cfu/ml，金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]菌落数73cfu/ml，枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501]菌落数66cfu/ml，白色念珠菌[CMCC（B）98 001]菌落数63cfu/ml，黑曲霉[CMCC（B）98 003]菌落数69cfu/ml。
2.3 实验
2.3.1 供试液制备
取供试品70克，加0.9%无菌氯化钠溶液70毫升转移至锥形瓶内，混匀，静止十分钟，取上清液稀释五十倍，分别置于七个滤筒中过滤，采用0.1%蛋白胨缓冲液进行冲洗，冲洗液用量为每筒900ml，每次100ml，在最后一次冲洗中分别加入1ml已制备好的上述7株菌液（约为10～100个/筒），依照2010年版《中国药典》二部附录无菌检查法，加入相应的培养基，按规定条件培养14天，每天观察并记录。
2.3.2 对照组
另取7个滤筒，分别加入1ml相应的试验菌，再加入相应等量培养基，作为对照，按规定条件培养14天，每天观察并记录。
2.3.3 供试品对照组
取供试品20克，加0.9%无菌氯化钠溶液20毫升转移至锥形瓶内，混匀，静止十分钟，取上清液稀释五十倍，分别置于七个滤筒中过滤，采用0.1%蛋白胨缓冲液进行冲洗，冲洗液用量为每筒900ml，每次100ml，再分别加入硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基，依照2010年版《中国药典》二部无菌检查法，按规定条件培养14天，每天观察并记录。
2.3.4 空白对照组
取试验用硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基，按规定条件培养14天，每天观察并记录。
2.3.5 阴性对照组
取冲洗用0.1%蛋白胨缓冲液及0.9%的无菌氯化钠溶液适量，分置于两个滤筒中过滤，再分别加入硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基，按规定条件培养14天，每天观察并记录。
2.3.6 培养
硫乙醇酸盐流体培养基桶30～35℃培养；真菌培养基桶23～28℃培养，培养 14天，每天观察并记录。
3 结果
结果表明，头孢美唑钠对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的抑菌活性已完全消除。头孢美唑钠无菌检查时可采用薄膜过滤法消除抑菌性，缓冲液冲洗量以900ml/筒为宜，可以选择大肠埃希菌或金黄色葡萄球菌为阳性对照菌。
参考文献
[1]彭凤英，卓超，黄文祥，李崇智.头孢美唑钠治疗呼吸系统急性细菌性感染疗效观察[J].重庆医科大學学报，2007（2）.
[2]孙卫红.注射用头孢美唑钠治疗中重度呼吸道细菌感染临床效果分析[J].中国卫生产业，2013（36）.
[3]陈华，李青，付晓辉，万山铭.头孢美唑钠治疗老年人下呼吸道感染34例疗效分析[J].现代临床医学，2007（5）.
[4]彭凤英，卓超，黄文祥，李崇智，江南，吴佳玉，熊瑛，王宋平，王荣丽，范贤明，湛晓勤，李多.头孢美唑钠注射剂治疗呼吸系统感染的随机、双盲、多中心临床试验[J].中国抗生素杂志，2006（6）.
[5]王宋平，熊瑛，李多，王荣丽，范贤明，湛晓勤.注射用头孢美唑钠治疗呼吸系统感染Ⅱ期临床研究[J].中国新药杂志，2006（4）.
关键词：头孢美唑钠；检查；验证
头孢美唑钠又称氰唑甲氧头孢菌素、头孢美他唑、先锋密林、头孢甲氧氰唑，为第二代头孢菌素，对大肠杆菌、克雷伯肺炎杆菌、奇异变形杆菌、沙门菌属等阴性杆菌对本品有较好的敏感性[1-5]。头孢美唑钠适用于敏感菌引起的败血症、支气管炎、胆管炎、胆囊炎、腹膜炎、支气管扩张症感染时、肺炎、慢性呼吸道疾患继发感染、肺化脓症（肺脓肿）、前庭大腺炎、子宫内感染、子宫附件炎、盆腔死腔炎、颌炎等。无菌检查法系指检查药品、敷料、缝合线、无菌器具及适用于药典要求无菌检查的其他品种是否无菌的一种方法。本实验对头孢美唑钠无菌检查消除抑菌性进行研究。
1 试验环境与材料
1.1 试验环境：在环境洁净度为B+A的无菌室中进行。
1.2 仪器：BOD生化培养箱（上海仙象仪器仪表有限公司）；赛多利斯BT25S分析天平（北京晨曦勇创科技有限公司）；全封闭集菌培养器（一次性）（浙江泰林生物技术股份有限公司）；细菌培养箱（上海仙象仪器仪表有限公司）；HTY-2000B智能集菌仪（杭州泰林生物技术设备有限公司）；YX-24LM不锈钢压力蒸汽灭菌器消毒锅24L升（河南三强医疗器械有限公司）；KQ250DE超声波清洗器超声波检测仪器（烟台鑫康商贸有限公司）。
1.3 试验用菌株：生孢梭菌[CMCC（B）64 941]、金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003、枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501]、白色念珠菌[CMCC（B）98 001]、黑曲霉[CMCC（B）98 003、大肠埃希菌ECMCC （B）44lO23。
1.4 培养基、稀释液及缓冲液
1.4.1 干粉培养基：玫瑰红钠琼脂培养基（连云港端峰生物科技有限公司）、改良马丁琼脂培养基（天津市津东天正精细化学试剂厂）、硫乙醇酸盐培养基（连云港端峰生物科技有限公司）、营养琼脂培养基（连云港端峰生物科技有限公司）。
1.4.2 细菌稀释液：氯化钠溶液（天津市津东天正精细化学试剂厂）。
1.4.3 冲洗用缓冲液：蛋白胨缓冲液（连云港端峰生物科技有限公司）。
2 方法与结果
2.1 菌液制备
2.1.1 取经培养一天的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌的肉汤培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-5～10-7，备用。
2.1.2 取经培养一天的生孢梭菌硫乙醇酸盐流体培养基的新鲜培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-7备用。
2.1.3 取经培养一天的白色念珠菌液体培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-5～10-6，备用。
2.1.4 取经培养一周的黑曲霉斜面培养物，加3～5ml 0.9%无菌氯化钠溶液，洗下黑曲霉孢子，吸取出孢子悬液1ml，加0.9%无菌氯化钠溶液适量稀释，用标准比浊管比浊，其浊度与标准比浊管相当后，取1ml稀释后的孢子悬液，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-4，备用。
2.2 菌液计数
每种菌液接种2个平皿，取其平均值。取白色念珠菌、黑曲霉菌菌液各1ml，注入约15毫升、45摄氏度改良马丁琼脂平皿，经26摄氏度生化培养箱培养72小时，金黄色葡萄球菌液、枯草芽孢杆菌液、生孢梭菌液、大肠埃希菌液各1 ml，注入约15 毫升、45摄氏度营养琼脂平皿，经36摄氏度生化培养箱培养48小时，活菌计数。生孢梭菌[CMCC（B）64 941]菌落数69cfu/ml，大肠埃希菌ECMCC （B）44lO23菌落数82cfu/ml，金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]菌落数73cfu/ml，枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501]菌落数66cfu/ml，白色念珠菌[CMCC（B）98 001]菌落数63cfu/ml，黑曲霉[CMCC（B）98 003]菌落数69cfu/ml。
2.3 实验
2.3.1 供试液制备
取供试品70克，加0.9%无菌氯化钠溶液70毫升转移至锥形瓶内，混匀，静止十分钟，取上清液稀释五十倍，分别置于七个滤筒中过滤，采用0.1%蛋白胨缓冲液进行冲洗，冲洗液用量为每筒900ml，每次100ml，在最后一次冲洗中分别加入1ml已制备好的上述7株菌液（约为10～100个/筒），依照2010年版《中国药典》二部附录无菌检查法，加入相应的培养基，按规定条件培养14天，每天观察并记录。
2.3.2 对照组
另取7个滤筒，分别加入1ml相应的试验菌，再加入相应等量培养基，作为对照，按规定条件培养14天，每天观察并记录。
2.3.3 供试品对照组
取供试品20克，加0.9%无菌氯化钠溶液20毫升转移至锥形瓶内，混匀，静止十分钟，取上清液稀释五十倍，分别置于七个滤筒中过滤，采用0.1%蛋白胨缓冲液进行冲洗，冲洗液用量为每筒900ml，每次100ml，再分别加入硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基，依照2010年版《中国药典》二部无菌检查法，按规定条件培养14天，每天观察并记录。
2.3.4 空白对照组
取试验用硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基，按规定条件培养14天，每天观察并记录。
2.3.5 阴性对照组
取冲洗用0.1%蛋白胨缓冲液及0.9%的无菌氯化钠溶液适量，分置于两个滤筒中过滤，再分别加入硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基，按规定条件培养14天，每天观察并记录。
2.3.6 培养
硫乙醇酸盐流体培养基桶30～35℃培养；真菌培养基桶23～28℃培养，培养 14天，每天观察并记录。
3 结果
结果表明，头孢美唑钠对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的抑菌活性已完全消除。头孢美唑钠无菌检查时可采用薄膜过滤法消除抑菌性，缓冲液冲洗量以900ml/筒为宜，可以选择大肠埃希菌或金黄色葡萄球菌为阳性对照菌。
参考文献
[1]彭凤英，卓超，黄文祥，李崇智.头孢美唑钠治疗呼吸系统急性细菌性感染疗效观察[J].重庆医科大學学报，2007（2）.
[2]孙卫红.注射用头孢美唑钠治疗中重度呼吸道细菌感染临床效果分析[J].中国卫生产业，2013（36）.
[3]陈华，李青，付晓辉，万山铭.头孢美唑钠治疗老年人下呼吸道感染34例疗效分析[J].现代临床医学，2007（5）.
[4]彭凤英，卓超，黄文祥，李崇智，江南，吴佳玉，熊瑛，王宋平，王荣丽，范贤明，湛晓勤，李多.头孢美唑钠注射剂治疗呼吸系统感染的随机、双盲、多中心临床试验[J].中国抗生素杂志，2006（6）.
[5]王宋平，熊瑛，李多，王荣丽，范贤明，湛晓勤.注射用头孢美唑钠治疗呼吸系统感染Ⅱ期临床研究[J].中国新药杂志，2006（4）.