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摘要：目的 建立测定解毒祛瘀滋肾方中芍药苷含量的方法，为其质量控制提供依据。方法 采用高效液相色谱法对解毒祛瘀滋肾方中芍药苷的含量进行测定，色谱柱为C18柱（10 mm×250 mm，5 ?m），流动相为乙腈-水（12∶88），流速1.0 mL/min，柱温25 ℃，检测波长为230 nm。结果 芍药苷含量测定的线性范围为0.78～3.90 ?g，r=0.999 7，加样回收率为99.68%。结论 本法快速、简便、准确，能有效控制解毒祛瘀滋肾方的质量。
关键词：解毒祛瘀滋肾方；芍药苷；高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）04-0061-02
解毒祛瘀滋肾方是本课题组研究肝肾阴虚、热毒血瘀型系统性红斑的基本方，主要由干地黄、升麻、赤芍、白花蛇舌草、青蒿、积雪草等组成。赤芍为方中活血祛瘀的主要代表药物，其味苦、性微寒，归肝经，功善清热凉血、散瘀止痛。赤芍的主要药效成分为芍药苷，具有镇静、镇痛、解痉、解毒、抗炎、抗过敏、血管扩张等药理活性[1]。白芍总苷具有调节免疫作用，芍药苷含量占总苷的90%以上[2]，因此，测定方中芍药苷的含量更具有临床意义。芍药苷的含量测定方法，本研究建立高效液相色谱法（HPLC）测定解毒祛瘀滋肾方中芍药苷含量的方法，为控制该方质量提供依据。
1 仪器与试药
美国ultimate3000高效液相色谱仪；电子分析天平（上海天平仪器厂）。
芍药苷对照品（批号110736-200933，中国药品生物制品检定所），解毒祛瘀滋肾方（批号090528、090530、090601）及阴性样品均由浙江中医药大学中药饮片厂提供；甲醇、乙腈为色谱纯；水为去离子双蒸水；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
2.2 供试品溶液的制备
取解毒祛瘀滋肾方水煎剂1袋200 mL，精密吸取20 mL置烧杯中，加入乙醇40 mL醇化，12 000 r/min离心15 min，取上清液，过有机微孔滤膜（0.45 ?m）滤过，取续滤液作为供试品溶液，备用。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取经五氧化二磷干燥过夜的芍药苷标准品适量，用甲醇溶解并定容至50 mL，摇匀，制成对照品储备液，取配好的对照品储备液依次稀释成浓度为39、78、117、156、195 ?g/mL的对照品溶液，即得。
2.4 专属性试验
取缺赤芍的解毒祛瘀滋肾方水煎剂1袋200 mL，按“2.2”项下方法制成阴性样品后，精密吸取阴性样品、对照品、供试品溶液，进样量20 ?L，供试品溶液图谱与对照品溶液图谱相同保留时间处有同样色谱峰，色谱峰分离度良好，基线稳定，阴性样品无干扰，见图1。
2.5 线性关系考察
2.6 精密度试验
取解毒祛瘀滋肾方水煎剂（090530）按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱分析条件，连续进样6次，每次进样20 ?L，以芍药苷面积为指标，结果RSD=1.17%，表明本法精密度良好。
2.7 重复性试验
取同一批号的解毒祛瘀滋肾方水煎剂（090530）样品，按“2.2”平行制备6份供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，依次进样20 ?L，测定芍药苷的含量，结果RSD=0.56%，表明该法重复性良好。
2.8 稳定性试验
取解毒祛瘀滋肾方水煎剂（090530）按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，进样20 ?L，在0、1、2、4、8、12 h测定芍药苷的峰面积，计算含量，结果RSD=1.03%，结果显示样品在12 h内稳定性良好。
2.9 加样回收率试验
分别取6份已知含量的解毒祛瘀滋肾方水煎剂（090530） 1 mL，分别加入已知浓度的芍药苷对照品溶液1 mL，按“2.2”项下方法平行制备供试品溶液，按“2.1”色谱条件进样20 ?L，测定芍药苷的含量，测定结果平均回收率为99.68%，RSD=1.85%。见表1。
3 讨论
赤芍主要活性成分为芍药苷、芍药内酯苷、羟基芍药苷、苯甲酰芍药苷等单萜类化合物，总称赤芍总苷[3]，其中芍药苷含量较高[4]。2005年版《中华人民共和国药典》（一部）中规定赤芍的定性鉴别及含量测定均以芍药苷作为指标成分，考虑该复方制剂的临床功能主治，因此，将芍药苷的定量测定列入本制剂的质量标准中以确保制剂的有效性。试验过程中曾用2005年版《中华人民共和国药典》（一部）赤芍中芍药苷含量测定的流动相甲醇- 0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（40︰65）[5]，结果主峰分离度不好，考虑有干扰，通过查阅文献和试验对比后选择了乙腈-水（12︰88）[6]作为本试验的流动相，结果芍药苷的基线分离效果好。
参考文献：
[1] 黄泰康.常用中药成分与药理手册[M].北京：中国医药科技出版社， 1994：1003.
[2] 郑辉.白芍总苷的抗风湿药理作用[J].浙江中西医结合杂志，2008， 18（8）：520.
[3] 阮金兰，赵钟祥，曾庆忠，等.赤芍化学成分和药理作用的研究进展[J].中国药理学通报，2003，19（9）：965-970.
[4] 邹忠梅，徐丽珍，杨世林，等.芍药总苷高效液相色谱指纹图谱研究[J].药学学报，2003，38（1）：46-49.
[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：化学工业出版社，2005：109.
[6] 李艳茹，丁爱英，康樱樱，等.前列平片赤芍中芍药苷的HPLC含量测定[J].齐鲁药事，2008，27（10）：595-597.
（收稿日期：2011-09-10，编辑：陈静）
关键词：解毒祛瘀滋肾方；芍药苷；高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）04-0061-02
解毒祛瘀滋肾方是本课题组研究肝肾阴虚、热毒血瘀型系统性红斑的基本方，主要由干地黄、升麻、赤芍、白花蛇舌草、青蒿、积雪草等组成。赤芍为方中活血祛瘀的主要代表药物，其味苦、性微寒，归肝经，功善清热凉血、散瘀止痛。赤芍的主要药效成分为芍药苷，具有镇静、镇痛、解痉、解毒、抗炎、抗过敏、血管扩张等药理活性[1]。白芍总苷具有调节免疫作用，芍药苷含量占总苷的90%以上[2]，因此，测定方中芍药苷的含量更具有临床意义。芍药苷的含量测定方法，本研究建立高效液相色谱法（HPLC）测定解毒祛瘀滋肾方中芍药苷含量的方法，为控制该方质量提供依据。
1 仪器与试药
美国ultimate3000高效液相色谱仪；电子分析天平（上海天平仪器厂）。
芍药苷对照品（批号110736-200933，中国药品生物制品检定所），解毒祛瘀滋肾方（批号090528、090530、090601）及阴性样品均由浙江中医药大学中药饮片厂提供；甲醇、乙腈为色谱纯；水为去离子双蒸水；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
2.2 供试品溶液的制备
取解毒祛瘀滋肾方水煎剂1袋200 mL，精密吸取20 mL置烧杯中，加入乙醇40 mL醇化，12 000 r/min离心15 min，取上清液，过有机微孔滤膜（0.45 ?m）滤过，取续滤液作为供试品溶液，备用。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取经五氧化二磷干燥过夜的芍药苷标准品适量，用甲醇溶解并定容至50 mL，摇匀，制成对照品储备液，取配好的对照品储备液依次稀释成浓度为39、78、117、156、195 ?g/mL的对照品溶液，即得。
2.4 专属性试验
取缺赤芍的解毒祛瘀滋肾方水煎剂1袋200 mL，按“2.2”项下方法制成阴性样品后，精密吸取阴性样品、对照品、供试品溶液，进样量20 ?L，供试品溶液图谱与对照品溶液图谱相同保留时间处有同样色谱峰，色谱峰分离度良好，基线稳定，阴性样品无干扰，见图1。
2.5 线性关系考察
2.6 精密度试验
取解毒祛瘀滋肾方水煎剂（090530）按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱分析条件，连续进样6次，每次进样20 ?L，以芍药苷面积为指标，结果RSD=1.17%，表明本法精密度良好。
2.7 重复性试验
取同一批号的解毒祛瘀滋肾方水煎剂（090530）样品，按“2.2”平行制备6份供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，依次进样20 ?L，测定芍药苷的含量，结果RSD=0.56%，表明该法重复性良好。
2.8 稳定性试验
取解毒祛瘀滋肾方水煎剂（090530）按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，进样20 ?L，在0、1、2、4、8、12 h测定芍药苷的峰面积，计算含量，结果RSD=1.03%，结果显示样品在12 h内稳定性良好。
2.9 加样回收率试验
分别取6份已知含量的解毒祛瘀滋肾方水煎剂（090530） 1 mL，分别加入已知浓度的芍药苷对照品溶液1 mL，按“2.2”项下方法平行制备供试品溶液，按“2.1”色谱条件进样20 ?L，测定芍药苷的含量，测定结果平均回收率为99.68%，RSD=1.85%。见表1。
3 讨论
赤芍主要活性成分为芍药苷、芍药内酯苷、羟基芍药苷、苯甲酰芍药苷等单萜类化合物，总称赤芍总苷[3]，其中芍药苷含量较高[4]。2005年版《中华人民共和国药典》（一部）中规定赤芍的定性鉴别及含量测定均以芍药苷作为指标成分，考虑该复方制剂的临床功能主治，因此，将芍药苷的定量测定列入本制剂的质量标准中以确保制剂的有效性。试验过程中曾用2005年版《中华人民共和国药典》（一部）赤芍中芍药苷含量测定的流动相甲醇- 0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（40︰65）[5]，结果主峰分离度不好，考虑有干扰，通过查阅文献和试验对比后选择了乙腈-水（12︰88）[6]作为本试验的流动相，结果芍药苷的基线分离效果好。
参考文献：
[1] 黄泰康.常用中药成分与药理手册[M].北京：中国医药科技出版社， 1994：1003.
[2] 郑辉.白芍总苷的抗风湿药理作用[J].浙江中西医结合杂志，2008， 18（8）：520.
[3] 阮金兰，赵钟祥，曾庆忠，等.赤芍化学成分和药理作用的研究进展[J].中国药理学通报，2003，19（9）：965-970.
[4] 邹忠梅，徐丽珍，杨世林，等.芍药总苷高效液相色谱指纹图谱研究[J].药学学报，2003，38（1）：46-49.
[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：化学工业出版社，2005：109.
[6] 李艳茹，丁爱英，康樱樱，等.前列平片赤芍中芍药苷的HPLC含量测定[J].齐鲁药事，2008，27（10）：595-597.
（收稿日期：2011-09-10，编辑：陈静）