论文部分内容阅读
【摘 要】 目的：观察九龙虫对脂多糖烟雾诱导慢性支气管炎模型大鼠超氧自由基和内皮素-1（ET-1）的影响。方法：取雄性SD大鼠60只，用脂多糖烟雾诱导法复制慢性支气管炎模型，经给药治疗后，测定血清和肺组织中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和内皮素-1（ET-1）含量。结果：与正常组比较，模型组血清和肺组织SOD水平降低（P<001），MDA和ET-1含量升高（P<001）；各给药组与模型组比较，以上指标均有改善（P<005或P<001）。结论：九龙虫具有抗慢性支气管炎作用，其机制可能与调节SOD、MDA和ET-1水平有关。
【关键词】 九龙虫；慢性支气管炎；超氧化物歧化酶；丙二醛；内皮素-1
【中图分类号】R2855 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）20-0016-02
慢性支气管炎是临床上一种常见病和多发病，以咳嗽、咳痰或伴有气喘等反复发作为主要症状。本实验拟通过在研究九龙虫对慢性支气管炎模型大鼠血清和肺组织SOD、MDA和ET-1的影响，探讨其抗慢性支气管炎作用机制。
1 仪器与材料
11 动物 清洁级雄性SD大鼠，体重（200±20）g，由成都达硕实验动物研究中心提供，许可证号：SCXK（川2013-24）。
12 药物与试剂 九龙虫散（本院自制，用前配成混悬液）； SOD（批号：20160115）、ET-1（批号：20151223）等试剂盒购自南京建成生物工程研究所；桂龙咳喘宁胶囊（批号：20160106，桂龙药业（安徽）有限公司）。
13 仪器 PT-MR3100D组织匀浆机（瑞士Polytron公司）；Z160M微量高速离心机（德国HERMLE）；台式冷冻离心机（上海安亭科学仪器公司）； UV754紫外可见分光光度计（上海佑科仪器仪表有限公司）。
2 方法
21 动物造模及分组给药 随机抽10只大鼠，为正常组。其余54只参照文献[1]建立脂多糖烟雾诱导慢性支气管大鼠模型：实验第1、14天将大鼠麻醉，固定，将01%脂多糖200μL用静脉导管针套管快速注入气管；从第2天开始，将大鼠分置在自制的2个烟室中，烟室大小为100cm×60cm×40cm，每个烟室放置27只大鼠，用硫磺15 g及烟叶、刨花、锯末各10g混匀，点燃熏烟，每天2次，每次1h，持续到第28天（第14天除外），第29天，将造模大鼠随机抽取4只，取肺组织切片，观察造模是否成功。正常组在无烟环境中正常饲养。将以上造模成功的大鼠混合并随机分为5组，即模型组、阳性对照组、九龙虫高、中、低剂量组，加上正常组共6组，正常组及模型组给予生理盐水15mL/kg·d，阳性对照组给予桂龙咳喘宁胶囊混悬液075g/kg·d，九龙虫高、中、低剂量组分别给予九龙虫混悬液004、002、001g/kg·d，连续给药15d。
22 观察指标
221 血清SOD、MDA和ET-1的测定 末次给药24h后，将大鼠断头取血约8mL，3000 r/min离心15min，制备血清，按试剂盒说明测定血清中SOD、MDA和ET-1含量。
222 肺组织SOD、MDA和ET-1的测定 大鼠处死后，在右肺中叶距离肺门1/3取肺组织约05g，用4℃生理盐水漂洗，吸湿，称重，剪碎，加入预冷的9倍生理盐水，用组织匀浆机制成10%的肺组织匀浆。3000 r/min离心15min，按试剂盒说明测定SOD、MDA和ET-1含量。
23 统计学处理 数据用SPSS190软件进行统计处理，各实验组数据均采用均数加减标准差（x[TX-*3]±s）表示，用方差分析进行显著性检验。P<005表示差异有统计学意义。
3 结果
31 对血清SOD、MDA和ET-1的影响 与正常组比较，模型组血清SOD水平降低（P<001），MDA和ET-1含量升高（P<001）；各给药组与模型组比较，SOD水平升高（P<005或P<001），MDA和ET-1含量明显降低（P<005或P<001）。
32 对肺组织SOD、MDA和ET-1的影响 与正常组比较，模型组肺组织SOD水平明显降低（P<001），MDA和ET-1含量明显升高（P<001）；各给药组与模型组比较，SOD水平明显升高（P<005或P<001），MDA和ET-1含量明显降低（P<005或P<001）。
4 讨论
研究表明[3]，氧化应激可引起和促进气道中多种炎症介质的产生，从而导致慢性支气管炎。SOD是一种清除体内氧自由基的重要酶，是机体抵抗氧化损伤的保护屏障之一，可以保护呼吸道细胞免受氧化损伤，减少炎症介质的产生，从而维持细胞内环境的稳定，具有非常重要的意义。MDA作为机体细胞脂质过氧化反应的一种产物，其含量越高表示机体氧化损伤程度越大，炎症介质的产生就会越多，容易引起和加重慢性支气管炎的病情。研究结果显示，九龙虫可有效提高慢性支气管炎大鼠血清和肺组织SOD水平，而降低MDA含量。（P<005）。
ET-1是目前发现最强的缩血管物质，是由内皮细胞合成内源性肽类物质，可引起肺血管收缩、支气管收缩以及气道和肺血管平滑肌增生，并且上调炎症反应，在慢性支气管炎的发生发展中起着重要作用。实验结果显示，九龙虫可有效降低慢性支气管炎大鼠血清和肺组织ET-1含量（P<005）。
综上所述，九龙虫具有抗慢性支气管炎的作用，其机制可能与提高机体血清和肺组织SOD水平，降低MDA和ET-1含量有关。
参考文献
[1]张良芝，谢文英，常学辉.爱罗咳喘宁口服液对慢性支气管炎大鼠模型LTB4、IL-8 表达的影响[J].中医学报，2014，29（19）：1267-1268.
[2]王勤，邓家刚，杨柯，等. 芒果苷对慢性支气管炎大鼠炎症因子及小鼠巨噬细胞环氧化酶-2表达的影响[J].中国中药杂志，2011，36（10）：1348-1352.
[3]MENG Y，YU C，LI T，et al. Expression and significance of Toll-like receptor-4 in rats lung established by passive smoking orassociated with intratracheal instillation of lipopolysaccharide[J]. Chin Med J，2013，93（28）：2230-2234.
（编辑：梁志庆）
【关键词】 九龙虫；慢性支气管炎；超氧化物歧化酶；丙二醛；内皮素-1
【中图分类号】R2855 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）20-0016-02
慢性支气管炎是临床上一种常见病和多发病，以咳嗽、咳痰或伴有气喘等反复发作为主要症状。本实验拟通过在研究九龙虫对慢性支气管炎模型大鼠血清和肺组织SOD、MDA和ET-1的影响，探讨其抗慢性支气管炎作用机制。
1 仪器与材料
11 动物 清洁级雄性SD大鼠，体重（200±20）g，由成都达硕实验动物研究中心提供，许可证号：SCXK（川2013-24）。
12 药物与试剂 九龙虫散（本院自制，用前配成混悬液）； SOD（批号：20160115）、ET-1（批号：20151223）等试剂盒购自南京建成生物工程研究所；桂龙咳喘宁胶囊（批号：20160106，桂龙药业（安徽）有限公司）。
13 仪器 PT-MR3100D组织匀浆机（瑞士Polytron公司）；Z160M微量高速离心机（德国HERMLE）；台式冷冻离心机（上海安亭科学仪器公司）； UV754紫外可见分光光度计（上海佑科仪器仪表有限公司）。
2 方法
21 动物造模及分组给药 随机抽10只大鼠，为正常组。其余54只参照文献[1]建立脂多糖烟雾诱导慢性支气管大鼠模型：实验第1、14天将大鼠麻醉，固定，将01%脂多糖200μL用静脉导管针套管快速注入气管；从第2天开始，将大鼠分置在自制的2个烟室中，烟室大小为100cm×60cm×40cm，每个烟室放置27只大鼠，用硫磺15 g及烟叶、刨花、锯末各10g混匀，点燃熏烟，每天2次，每次1h，持续到第28天（第14天除外），第29天，将造模大鼠随机抽取4只，取肺组织切片，观察造模是否成功。正常组在无烟环境中正常饲养。将以上造模成功的大鼠混合并随机分为5组，即模型组、阳性对照组、九龙虫高、中、低剂量组，加上正常组共6组，正常组及模型组给予生理盐水15mL/kg·d，阳性对照组给予桂龙咳喘宁胶囊混悬液075g/kg·d，九龙虫高、中、低剂量组分别给予九龙虫混悬液004、002、001g/kg·d，连续给药15d。
22 观察指标
221 血清SOD、MDA和ET-1的测定 末次给药24h后，将大鼠断头取血约8mL，3000 r/min离心15min，制备血清，按试剂盒说明测定血清中SOD、MDA和ET-1含量。
222 肺组织SOD、MDA和ET-1的测定 大鼠处死后，在右肺中叶距离肺门1/3取肺组织约05g，用4℃生理盐水漂洗，吸湿，称重，剪碎，加入预冷的9倍生理盐水，用组织匀浆机制成10%的肺组织匀浆。3000 r/min离心15min，按试剂盒说明测定SOD、MDA和ET-1含量。
23 统计学处理 数据用SPSS190软件进行统计处理，各实验组数据均采用均数加减标准差（x[TX-*3]±s）表示，用方差分析进行显著性检验。P<005表示差异有统计学意义。
3 结果
31 对血清SOD、MDA和ET-1的影响 与正常组比较，模型组血清SOD水平降低（P<001），MDA和ET-1含量升高（P<001）；各给药组与模型组比较，SOD水平升高（P<005或P<001），MDA和ET-1含量明显降低（P<005或P<001）。
32 对肺组织SOD、MDA和ET-1的影响 与正常组比较，模型组肺组织SOD水平明显降低（P<001），MDA和ET-1含量明显升高（P<001）；各给药组与模型组比较，SOD水平明显升高（P<005或P<001），MDA和ET-1含量明显降低（P<005或P<001）。
4 讨论
研究表明[3]，氧化应激可引起和促进气道中多种炎症介质的产生，从而导致慢性支气管炎。SOD是一种清除体内氧自由基的重要酶，是机体抵抗氧化损伤的保护屏障之一，可以保护呼吸道细胞免受氧化损伤，减少炎症介质的产生，从而维持细胞内环境的稳定，具有非常重要的意义。MDA作为机体细胞脂质过氧化反应的一种产物，其含量越高表示机体氧化损伤程度越大，炎症介质的产生就会越多，容易引起和加重慢性支气管炎的病情。研究结果显示，九龙虫可有效提高慢性支气管炎大鼠血清和肺组织SOD水平，而降低MDA含量。（P<005）。
ET-1是目前发现最强的缩血管物质，是由内皮细胞合成内源性肽类物质，可引起肺血管收缩、支气管收缩以及气道和肺血管平滑肌增生，并且上调炎症反应，在慢性支气管炎的发生发展中起着重要作用。实验结果显示，九龙虫可有效降低慢性支气管炎大鼠血清和肺组织ET-1含量（P<005）。
综上所述，九龙虫具有抗慢性支气管炎的作用，其机制可能与提高机体血清和肺组织SOD水平，降低MDA和ET-1含量有关。
参考文献
[1]张良芝，谢文英，常学辉.爱罗咳喘宁口服液对慢性支气管炎大鼠模型LTB4、IL-8 表达的影响[J].中医学报，2014，29（19）：1267-1268.
[2]王勤，邓家刚，杨柯，等. 芒果苷对慢性支气管炎大鼠炎症因子及小鼠巨噬细胞环氧化酶-2表达的影响[J].中国中药杂志，2011，36（10）：1348-1352.
[3]MENG Y，YU C，LI T，et al. Expression and significance of Toll-like receptor-4 in rats lung established by passive smoking orassociated with intratracheal instillation of lipopolysaccharide[J]. Chin Med J，2013，93（28）：2230-2234.
（编辑：梁志庆）