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核蛋白Sam68的原核表达及鉴定

来源 :黑龙江八一农垦大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：liutingkaoyanhao

【摘 要】

：

为了构建p GEX-4T-1-Sam68原核表达载体,表达并鉴定GST-Sam68融合蛋白,采用PCR扩增Sam68基因,插入p GEX-4T-1的Eco R I和Sal I位点,并转化Rosetta（DE3）大肠杆菌,IPTG诱导表达,S

【作 者】

：

张华 陈宁 丁筠 邹德华 潘子夜 李鹏飞 李丽阳 肖丽杰 曹 

【机 构】

：

黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院,哈尔滨医科大学附属第五医院肾内科

【出 处】

：

黑龙江八一农垦大学学报

【发表日期】

：

2017年3期

【关键词】

：

Sam68 原核表达 载体构建 鉴定 Sam68   prokaryotic expression   construction of vector  iden 

【基金项目】

：

国家自然科学基金（31300145、31570159）,黑龙江省教育厅科学技术研究面上项目（12541578）,中国博士后科学基金面上项目（2016M590297）,黑龙江省政府博士后资助经费（LBH-Z15188）,黑龙江八一农垦大学博士科研启动基金（XDB2015-16）.

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为了构建p GEX-4T-1-Sam68原核表达载体,表达并鉴定GST-Sam68融合蛋白,采用PCR扩增Sam68基因,插入p GEX-4T-1的Eco R I和Sal I位点,并转化Rosetta（DE3）大肠杆菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot验证蛋白表达,GST pull-down技术验证Sam68的结合活性。酶切和测序结果证实Sam68基因正确插入p GEX-4T-1载体中,载体能够在Rosetta（DE3）细胞中正确表达,且纯化的GST-Sam68蛋白具有与PI3

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