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摘要[目的]在现有方法的基础上，优化前处理方法，总结出一套更合理的农药残留检测方法。[方法]采用液相色谱法检测，对旋转蒸发法、氮吹法、水浴法3种浓缩方法，2种提取液体积和4种洗脱液体积回收率进行比较。[结果]上机条件相同的情况下，旋转蒸发法、氮吹法、水浴法3种方法回收率水平无明显差异；2种提取液体积和4种洗脱液体积试验结果表明回收率水平无明显差异。[结论]综合成本、时间、准确度等几方面因素，以5 ml提取液水浴法浓缩，6 ml淋洗液淋洗为最佳。
关键词安捷伦快速液相；农药残留；前处理方法优化
中图分类号S481+.8文献标识码A文章编号0517-6611（2015）21-119-02
笔者在2011年对安捷伦快速液相检测蔬菜水果中7种农药残留的上机方法进行了优化，在近年的应用中发现前处理方法还有很大的优化空间，为此，笔者对旋转蒸发法、氮吹法、水浴法3种浓缩方法，不同提取液和淋洗液体积的回收率进行了试验比较，以期总结出一套更合理的农药残留检测方法。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1试验材料。试验所用样品为从水果、食用菌、叶菜、茎菜和茄果类五大类果蔬中各选取1种，样品分别为苹果、平菇、油麦菜、芹菜、番茄。从超市购买样品，重量约3 kg。
1.1.2标准溶液。100 mg/L的吡虫啉、啶虫脒、多菌灵、除虫脲、灭幼脲、辛硫磷、阿维菌素单一标准溶液均由农业部环境保护科研监测所提供；美国Agilent固相萃取氨基柱，容积6 ml，填充物500 mg；乙腈、甲醇、二氯甲烷为色谱纯，均为迪马科技有限公司产品。
1.1.3试剂。去离子水采用密理博实验室台式超纯化水机制备；0.22 μm有機系滤膜。
1.1.4主要仪器。
1200SL型快速液相色谱仪系统，包含二极管检测器、二元梯度泵、自动进样器、在线脱气机和恒温柱温箱，为美国Agilent公司产品；ZORBAX Eclipse plus C18色谱柱，Narrow Bore RR 2.1×150 mm，3.5Micron（美国Agilent公司）。
1.2色谱条件
色谱柱：C18色谱柱；二极管检测器：时间为0、2.6、10.0、13.8、16.0 min时，波长依次为270、245、254、280、245 nm。
流动相：组成及梯度变化见表1；
流速为0.5 ml/min；
进样量为5 μl；
柱温为40 ℃。
采用外标法峰面积定量。
1.3方法
1.3.1样品制备。通过四分法取不少于1 000.00 g的样品，将可食部分切碎，充分混匀放入食物调理机粉碎，制成待测样。
1.3.2不同浓缩方法试验。
1.3.2.1样品前处理。
每个样品用150 ml烧杯称取3000 g各3份，其中1份作为空白对照，另外2份作为添加平行，添加量为0.5 mg/kg。分别加入60.0 ml乙腈，高速匀浆2 min，然后过滤，滤液收集到预先装有140 ℃烘烤4 h的10.00 g氯化钠的100 ml具塞量筒中，剧烈振荡1 min，在室温下静置分层30 min。
前处理过程中提取方法一致，浓缩方法不同，从100 ml具塞量筒中吸取10.0 ml乙腈相溶液，分别用旋转蒸发法、水浴法、氮吹法蒸发至近干（均为50 ℃）；加入2.0 ml甲醇+二氯甲烷（5+95）的混合液溶解残渣，待净化。
1.3.2.2净化。将氨基柱分别用4.0 ml甲醇+二氯甲烷（5+95）的混合液预洗，当预洗溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即加入样品溶解液，用25 ml比色管收集洗脱液，用4.0 ml甲醇+二氯甲烷（5+95）洗涤烧杯后过柱，并重复1次。将比色管置于氮吹仪上，水浴温度为50 ℃，氮吹蒸发至近干，分别用5.0 ml甲醇+水（3+2）的混合液溶解。在混合器上混匀后，用0.45 μm有机滤膜过滤，待测。
1.3.2.3上机测定。上机测定时3个处理仪器条件均一致。试验重复3次。
1.3.32种提取液体积和4种洗脱液体积比较试验。
样品前处理参照“1.3.2.1”，其中浓缩采用水浴法。提取液吸取体积和洗脱液体积试验设计见表2。上机测定时仪器条件均一致。试验重复3次。
2结果与分析
2.1不同浓缩方法比较
2.1.1准确度比较。
按加标回收率=（加样后总测定量-加样前测定量）/理论加样量×100%计算，以其反映方法的准确度。5个样品不同参数的平均加标回收率结果（表3）表明，3种浓缩方法的加标回收率都符合检测要求（80%～110%）。
方差分析（可重复双因素分析）表明，用旋转蒸发法、水浴法、氮吹法3种浓缩方法对添加相同浓度（0.5 mg/kg）混合标准品的样品进行前处理，在上机条件相同的情况下，3种方法回收率无明显差异，均满足同时测定7种农药残留分析要求。
2.1.2精密度比较。
计算3种浓缩方法5个样品之间的回收率相对标准偏差（RSD），以其反映方法的精密度。由表4可知，3种浓缩方法的RSD分别为2.01%～9.83%、2.24%～8.94%、2.30%～9.48%。从7种农药3个浓缩处理方法的RSD总体比较分析可见，处理2即水浴法相对较好。
2.1.3花费时间和花费成本比较。
通过对3 种浓缩处理方法消耗时间进行比较发现，旋转蒸发法需2～4
min，水浴法需35 min左右，氮吹法需40 min以上。在样品
较少的情况下，旋转蒸发法效率较高；样品较多时，因水浴法
可一次性处理几十个样品，极大地节约时间，所以选择水浴法为佳；而氮吹法虽然也可一次性处理多个样品，但其耗时长且成本高，所以不建议采用。同时在旋转蒸发仪、水浴锅、氮吹仪3种试验设备中，水浴锅成本较低且常用。因此，在做大批量样品时，对于一般实验室而言，水浴法比较有优势。
2.22种提取液体积和4种洗脱液体积比较
可重复双因素分析结果表明，
3次重复试验7个参数样本F值均远小于 F crit值，表明数据无明显差异。因此，综合考虑效率、成本等因素，不同提取液体积和洗脱体积的4个组合中，以吸取提取液体积5 ml浓缩、洗脱液洗脱体积6 ml为最佳。
3结论
以现有方法同时测定吡虫啉、啶虫脒、多菌灵、除虫脲、灭幼脲、辛硫磷、阿维菌素7种农药残留时，前处理中浓缩采用旋转蒸发法、氮吹法、水浴法的准确度和精密度均符合农药多残留检测的技术要求。但从时间、成本、操作等方面综合考虑，在样品量较大的情况下采用恒温水浴法处理最好；提取液吸取体积以5 ml，洗脱液洗脱体积以6 ml为最佳。
参考文献
[1] 孙红艳，范文，贾琦，等.安捷伦快速液相检测蔬菜水果中7种农药残留的方法优化[J].陕西农业科学，2011（6）：104-106.
[2] 中华人民共和国农业部.（NY/TT761-2008）蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留检测方法[S].北京：中国标准出版社，2008.
[3] 陈莉，卢发家，韦军，等.3 种浓缩方法对莴笋中7 种有机磷农药残留量的分析比较[J].广西植保，2008，21（3）：18-20.
[4] 鲍晓霞，乔东，章晓氡，等.GB/T 27404-2008 实验室质量控制规范 食品理化检测 附录F[S].北京：中国标准出版社，2008.
关键词安捷伦快速液相；农药残留；前处理方法优化
中图分类号S481+.8文献标识码A文章编号0517-6611（2015）21-119-02
笔者在2011年对安捷伦快速液相检测蔬菜水果中7种农药残留的上机方法进行了优化，在近年的应用中发现前处理方法还有很大的优化空间，为此，笔者对旋转蒸发法、氮吹法、水浴法3种浓缩方法，不同提取液和淋洗液体积的回收率进行了试验比较，以期总结出一套更合理的农药残留检测方法。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1试验材料。试验所用样品为从水果、食用菌、叶菜、茎菜和茄果类五大类果蔬中各选取1种，样品分别为苹果、平菇、油麦菜、芹菜、番茄。从超市购买样品，重量约3 kg。
1.1.2标准溶液。100 mg/L的吡虫啉、啶虫脒、多菌灵、除虫脲、灭幼脲、辛硫磷、阿维菌素单一标准溶液均由农业部环境保护科研监测所提供；美国Agilent固相萃取氨基柱，容积6 ml，填充物500 mg；乙腈、甲醇、二氯甲烷为色谱纯，均为迪马科技有限公司产品。
1.1.3试剂。去离子水采用密理博实验室台式超纯化水机制备；0.22 μm有機系滤膜。
1.1.4主要仪器。
1200SL型快速液相色谱仪系统，包含二极管检测器、二元梯度泵、自动进样器、在线脱气机和恒温柱温箱，为美国Agilent公司产品；ZORBAX Eclipse plus C18色谱柱，Narrow Bore RR 2.1×150 mm，3.5Micron（美国Agilent公司）。
1.2色谱条件
色谱柱：C18色谱柱；二极管检测器：时间为0、2.6、10.0、13.8、16.0 min时，波长依次为270、245、254、280、245 nm。
流动相：组成及梯度变化见表1；
流速为0.5 ml/min；
进样量为5 μl；
柱温为40 ℃。
采用外标法峰面积定量。
1.3方法
1.3.1样品制备。通过四分法取不少于1 000.00 g的样品，将可食部分切碎，充分混匀放入食物调理机粉碎，制成待测样。
1.3.2不同浓缩方法试验。
1.3.2.1样品前处理。
每个样品用150 ml烧杯称取3000 g各3份，其中1份作为空白对照，另外2份作为添加平行，添加量为0.5 mg/kg。分别加入60.0 ml乙腈，高速匀浆2 min，然后过滤，滤液收集到预先装有140 ℃烘烤4 h的10.00 g氯化钠的100 ml具塞量筒中，剧烈振荡1 min，在室温下静置分层30 min。
前处理过程中提取方法一致，浓缩方法不同，从100 ml具塞量筒中吸取10.0 ml乙腈相溶液，分别用旋转蒸发法、水浴法、氮吹法蒸发至近干（均为50 ℃）；加入2.0 ml甲醇+二氯甲烷（5+95）的混合液溶解残渣，待净化。
1.3.2.2净化。将氨基柱分别用4.0 ml甲醇+二氯甲烷（5+95）的混合液预洗，当预洗溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即加入样品溶解液，用25 ml比色管收集洗脱液，用4.0 ml甲醇+二氯甲烷（5+95）洗涤烧杯后过柱，并重复1次。将比色管置于氮吹仪上，水浴温度为50 ℃，氮吹蒸发至近干，分别用5.0 ml甲醇+水（3+2）的混合液溶解。在混合器上混匀后，用0.45 μm有机滤膜过滤，待测。
1.3.2.3上机测定。上机测定时3个处理仪器条件均一致。试验重复3次。
1.3.32种提取液体积和4种洗脱液体积比较试验。
样品前处理参照“1.3.2.1”，其中浓缩采用水浴法。提取液吸取体积和洗脱液体积试验设计见表2。上机测定时仪器条件均一致。试验重复3次。
2结果与分析
2.1不同浓缩方法比较
2.1.1准确度比较。
按加标回收率=（加样后总测定量-加样前测定量）/理论加样量×100%计算，以其反映方法的准确度。5个样品不同参数的平均加标回收率结果（表3）表明，3种浓缩方法的加标回收率都符合检测要求（80%～110%）。
方差分析（可重复双因素分析）表明，用旋转蒸发法、水浴法、氮吹法3种浓缩方法对添加相同浓度（0.5 mg/kg）混合标准品的样品进行前处理，在上机条件相同的情况下，3种方法回收率无明显差异，均满足同时测定7种农药残留分析要求。
2.1.2精密度比较。
计算3种浓缩方法5个样品之间的回收率相对标准偏差（RSD），以其反映方法的精密度。由表4可知，3种浓缩方法的RSD分别为2.01%～9.83%、2.24%～8.94%、2.30%～9.48%。从7种农药3个浓缩处理方法的RSD总体比较分析可见，处理2即水浴法相对较好。
2.1.3花费时间和花费成本比较。
通过对3 种浓缩处理方法消耗时间进行比较发现，旋转蒸发法需2～4
min，水浴法需35 min左右，氮吹法需40 min以上。在样品
较少的情况下，旋转蒸发法效率较高；样品较多时，因水浴法
可一次性处理几十个样品，极大地节约时间，所以选择水浴法为佳；而氮吹法虽然也可一次性处理多个样品，但其耗时长且成本高，所以不建议采用。同时在旋转蒸发仪、水浴锅、氮吹仪3种试验设备中，水浴锅成本较低且常用。因此，在做大批量样品时，对于一般实验室而言，水浴法比较有优势。
2.22种提取液体积和4种洗脱液体积比较
可重复双因素分析结果表明，
3次重复试验7个参数样本F值均远小于 F crit值，表明数据无明显差异。因此，综合考虑效率、成本等因素，不同提取液体积和洗脱体积的4个组合中，以吸取提取液体积5 ml浓缩、洗脱液洗脱体积6 ml为最佳。
3结论
以现有方法同时测定吡虫啉、啶虫脒、多菌灵、除虫脲、灭幼脲、辛硫磷、阿维菌素7种农药残留时，前处理中浓缩采用旋转蒸发法、氮吹法、水浴法的准确度和精密度均符合农药多残留检测的技术要求。但从时间、成本、操作等方面综合考虑，在样品量较大的情况下采用恒温水浴法处理最好；提取液吸取体积以5 ml，洗脱液洗脱体积以6 ml为最佳。
参考文献
[1] 孙红艳，范文，贾琦，等.安捷伦快速液相检测蔬菜水果中7种农药残留的方法优化[J].陕西农业科学，2011（6）：104-106.
[2] 中华人民共和国农业部.（NY/TT761-2008）蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留检测方法[S].北京：中国标准出版社，2008.
[3] 陈莉，卢发家，韦军，等.3 种浓缩方法对莴笋中7 种有机磷农药残留量的分析比较[J].广西植保，2008，21（3）：18-20.
[4] 鲍晓霞，乔东，章晓氡，等.GB/T 27404-2008 实验室质量控制规范 食品理化检测 附录F[S].北京：中国标准出版社，2008.