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目的
优化二代CD19嵌合抗原受体（CD19-CAR）逆转录病毒载体对人原代T细胞的转染效率。
方法应用重组DNA技术将CD19-CAR构建入逆转录病毒载体，转入plat-A包装细胞收集病毒上清并转染人原代T细胞及K562细胞系，采用流式细胞术检测不同条件下的转染效率，用RT-PCR方法检测目的基因的表达情况，用ELISA法检测IFN-γ、TNF-α表达水平。
结果①MigR1- CD19-CAR逆转录病毒载体成功构建后包装高滴度逆转率病毒；②相同条件下，MigR1-CD19-CAR逆转录病毒对K562细胞系转染效率显著高于T细胞；③对T细胞，离心120 min组的转染率为（54.5± 14.6)%，明显高于未离心组、离心30 min组及离心60 min组（P值均<0.05）；④CD3/CD28磁珠与rhIL-2联合对人T细胞活化扩增效率个体差异显著，根据扩增倍数优化个体转染时机可提高转染效率（最高达69.3%)，且RT- PCR检测证实CD19- CAR目的基因在转染后72 h T细胞中高效特异性转录；⑤CD19-CAR-T细胞与CD19-K562细胞共培养组IFN-γ、TNF-α表达水平均增加，分别为（13 230± 1 543)pg/ml、(4 217±211)pg/ml，与阴性对照组比较差异均有统计学意义（P值均<0.01）。
结论通过MigR1-CD19-CAR逆转录病毒载体转染人原代T细胞，并通过延长离心转染时间、根据扩增倍数确定个体转染时机而成功优化转染效率，RT-PCR检测CD19-CAR目的基因在转染后人T细胞中高效特异性转录，CD19-CAR-T细胞特异性识别靶细胞引发IFN-γ、TNF-α表达水平增加。