【摘 要】
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目的建立基于微滴式数字PCR(dd PCR)技术定量检测结直肠癌(CRC)患者血浆循环游离DNA(cfDNA)含量的方法,并初步探讨其临床应用。方法设计β-actin基因dd PCR特异性引物和探针,
【机 构】
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温州医科大学附属第二医院育婴儿童医院检验科; 温州医科大学检验医学院生命科学学院;
【基金项目】
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浙江省科技厅分析测试科技计划项目(2016C37073);温州市科技局公益性科技计划项目(Y20140732)
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目的建立基于微滴式数字PCR(dd PCR)技术定量检测结直肠癌(CRC)患者血浆循环游离DNA(cfDNA)含量的方法,并初步探讨其临床应用。方法设计β-actin基因dd PCR特异性引物和探针,通过条件优化建立cfDNA定量检测方法;用不同浓度标准品验证所建方法的特异性、灵敏度、线性及重复性;并用该法检测39例CRC患者与40例健康人群血浆标本,比较CRC患者与对照组、术前与术后组血浆cfDNA浓度差异。结果所建方法无非特异性扩增,检测灵敏度为0.29 copies/μl,在模板浓度为10 pg/μl~10 ng/μl内线性良好(y=-2.34+33.17x,r~2=0.999),批内CV为9.85%,批间CV为11.04%;CRC患者血浆cfDNA结果 (7.20±5.15)copies/μl明显高于对照组(3.38±1.97)copies/μl(P<0.01);术后组血浆cfDNA浓度为(3.90±3.39)copies/μl,较术前组明显下降(P<0.01)。结论建立的dd PCR定量检测血浆cfDNA方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可为CRC患者的临床决策和病程监控提供一种无创手段。
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