目的三叶青提物对体外培养NK细胞功能的影响。方法用物理和化学方法分离和纯化三叶青中的有效成分,并用高效液相色谱(HPLC)法鉴定提取纯度。分离慢性乙肝患者外周血单个核细胞(PBMC);在体外用磁分法从PBMC中分离NK细胞;用NK细胞培养基将分离后的NK细胞进行定向培养。收集培养第7天的NK细胞给予不同浓度的三叶青提取液诱导72h:用CCK-8法检测人NK细胞增殖率;流式细胞术(FCM)检测三叶青提取物作用前后NK细胞穿孔素(PFP)、颗粒酶B(Gr B)、CD107a的表达;FCM法检测三叶青提取物诱导72h后NK细胞的IFN-γ表达。结果将三叶青根块分别提取9个部分(分别命名为TH-t、TH-p、TH-a、TH-b、TH-w、TH-w1、TH-w2、TH-w3和TH-w4)。各部位三叶青提取物对NK细胞均有促进生长作用,差异有统计学意义(P<0.05),在药物浓度相同条件下,以水煮脱糖部位(Th-w3)时促NK细胞生长活性最强;总提取物(Th-t)、石油醚部位(Th-p)和水部位脱糖流分次之,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。三叶青总提取物作用NK细胞72h后,其穿孔素和颗粒酶B阳性表达均明显升高,以0.62μg/ml三叶青总提取物组的穿孔素和颗粒酶B阳性表达率达到最明显,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。经三叶青提取物诱导的NK细胞其IFN-γ表达以浓度为0.62μg/ml时最高(99.01%),较对照组(88.46%)显著上升(P<0.05)。结论三叶青提取物能促进慢性乙型肝炎患者NK细胞增殖和功能改变,上调NK细胞表面PFP、Gr B、CD107a和IFN-γ的表达。