【摘 要】
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目的构建人凝血因子Ⅸ小基因（Mini-hF9）及无义突变体，检测其mRNA表达水平，分析microRNA125对无义突变的F9基因表达调控的分子机制。方法利用PCR定点突变技术构建若干无义突变的人Mini-hF9并转染哺乳动物细胞HEK293T等，同时转染miR-125模拟物，通过实时荧光定量PCR (q-PCR）检测Mini-hF9基因mRNA表达水平。结果成功构建了Mini-hF9并在细胞中正
【机 构】
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030001 太原，山西医科大学第二临床医学院、山西医科大学第二医院血液科,030001 太原，山西医科大学第二临床医学院、山西医科大学第二医院血液科,山西大学生物技术研究所、化学生物学与分子工程教育
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目的构建人凝血因子Ⅸ小基因（Mini-hF9）及无义突变体，检测其mRNA表达水平，分析microRNA125对无义突变的F9基因表达调控的分子机制。
方法利用PCR定点突变技术构建若干无义突变的人Mini-hF9并转染哺乳动物细胞HEK293T等，同时转染miR-125模拟物，通过实时荧光定量PCR (q-PCR）检测Mini-hF9基因mRNA表达水平。
结果成功构建了Mini-hF9并在细胞中正确剪接。成功构建了无义突变体M1 (nt 34 G>T in Exon 7）、M2 （nt 52 G>T in Exon 7）和M3 (nt 85 G>T in Exon 7）。M1和M2突变体中Mini-hF9基因mRNA表达水平分别为野生型的14.1%（t=15.464，P=0.004）和22.4%（t=15.755 ，P=0.004），通过放线菌酮处理实验证实这是由于无义介导的mRNA降解（nonsense-mediated mRNA decay, NMD）所致。分别转染miR-125a模拟物和miR-125b模拟物后，M1突变体中Mini-hF9基因mRNA水平分别升高到1.70倍（t=-4.883 ，P=0.039）和2.40倍（t=-17.537，P= 0.003），M2突变体Mini-hF9mRNA水平分别升高到2.02倍（t=-19.264，P=0.003）和2.07倍（t=-9.158，P=0.012 ）。
结论无义突变发生的位置是触发NMD途径的一个关键因素；microRNA125能够通过抑制NMD途径提高无义突变的凝血因子Ⅸ的mRNA水平。
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