【摘 要】
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目的 探讨siRNA抑制弓形虫硫氧还蛋白还原酶对弓形虫增殖的影响. 方法 将针对弓形虫硫氧还蛋白还原酶合成3组siRNA通过一定的电压和脉冲时间电转弓形虫,将弓形虫在电转30 min
【机 构】
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重庆医科大学病原生物学教研室,重庆400016;重庆医科大学分子与肿瘤研究中心
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目的 探讨siRNA抑制弓形虫硫氧还蛋白还原酶对弓形虫增殖的影响. 方法 将针对弓形虫硫氧还蛋白还原酶合成3组siRNA通过一定的电压和脉冲时间电转弓形虫,将弓形虫在电转30 min后接种到MDA-MB-231细胞,24 h后Giemsa染色,并拍照,光镜下计数细胞内平均的弓形虫速殖子数目;36 h后采用荧光定量PCR检测硫氧还蛋白还原酶基因的相对表达量,试剂盒法测定酶的活性. 结果 Giemsa染色后计数细胞内平均弓形虫速殖子数分别为(9±7)个、(13±10)个、(6±5)个、(37±17)个,RNA干扰后弓形虫硫氧还蛋白还原酶基因相对表达量siRNA001、002、003组分别为0.54±0.09、0.33±0.04、0.21±0.03,与阴性对照组0.93±0.08比较差异有统计学意义(t1=1.865,t2=1.898,t3=1.843,P＜0.05),酶活性也显著下降. 结论 通过siRNA干扰弓形虫弓形虫硫氧还蛋白还原酶基因的表达,能抑制弓形虫在细胞内的增殖.
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