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目的:采用HPLC（高效液相）指纹图谱分析研究葛根芩连汤中药物的成分。方法:在指纹图谱研究方法中采用HPLC-DAD（高效液相-二极管阵列检测器）,HPLC指纹图谱试验色谱条件:进样量为20μL,色谱柱选择直径5μm的Ultimate AQ C18柱,柱温30℃,流动相A是0. 02 mol/L醋酸铵+0. 3%三乙胺+1%冰醋酸混合而成,最终PH值为4. 3;流动相B是乙腈,流速统一为0. 7 m L/min。检测波长通过预实验不断调整,最终葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素、甘草酸铵和甘草次酸的检查波长为250 nm;黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素和甘草苷检测波长为280 nm;余下对照品检测波长为346 nm;并对HPLC精密度试验、重复性试验、稳定性试验、专属性试验、加样回收率试验、线性回归试验等方法学进行严谨性考察,通过比较混合对照品溶液指纹图谱,葛根芩连汤单味药材指纹图谱和葛根芩连汤指纹图谱,分析研究葛根芩连汤中的14个药物成分。结果:1)精密度试验平均相对峰面积RSD为0. 38%,重复性试验平均相对峰面积RSD为1. 14%,稳定性试验平均相对峰面积RSD为1. 03%,专属性试验结果良好。2) 14个药物成分线性回归良好,且加样回收试验中平均回收率的范围是96. 45%～104. 69%,RSD的范围是为0. 65%～2. 11%。3)本研究根据不同的检测波长250nm、280 nm和346 nm,将混合对照品指纹图谱分为3张图,便于后续分析,同时标注14个对照品成分的峰号。4)在检测波长为250 nm时,葛根指纹图谱有11个特征峰,而甘草有2个特征峰;在检测波长280 nm时,黄芩有6个特征峰,而在检测波长346 nm时,黄连有4个特征峰。5)在葛根芩连汤的指纹图谱中显示波长250 nm时有12个特征峰,其中1～11主要体现葛根的药物成分特征,而12主要体现甘草的药物成分特征;波长280 nm时有7个特征峰,主要体现甘草和黄芩的药物成分特征;波长346 nm时有4个特征峰,主要体现黄连的药物成分特征。结论:从整体性解析葛根芩连汤剂HPLC指纹图谱的药物成分来源,为葛根芩连汤中含有的药物成分等物质基础、药理相关性研究提供实验基础。