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摘 要：为了选择适合山东地区的药用及保健功能桑树品种，选取山东省内有代表性的桑品种17个，采用反相高效液相色谱法测定桑叶的1-脱氧野尻霉素（1-DNJ）含量。结果表明：桑属不同种间1-DNJ含量存在显著性差异，白桑最高；不同桑品种间的1-DNJ含量差别显著，晋选6号和秋雨分别是鲁桑和白桑中含量最高的品种，达02777%和03281%，适合直接作为桑叶1-DNJ开发的专用桑品种或育种材料。
关键词：1-脱氧野尻霉素；桑品种；反相高效液相色谱法
中圖分类号：S888.2 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2012）12-0100-03
Determination of 1-Deoxynojimycin Contents in Leaves
of Some Mulberry Cultivars in Shandong Province
Li HuaXiu1， Chen ChuanJie1， Gu YinYu1， Shi XinQin1*， Li Feng2， Zhu Hong1
（1.Shandong Institute of Sericultural Science， Yantai 264002， China；
2.Department of Personnel， Shandong Academy of Agricultural Sciences， Jinan 250100， China）
Abstract In order to select mulberry cultivars with medicinal and health function adaptable to Shandong area， 17 representative mulberry cultivars were used to determine the 1-deoxynojimycin （1-DNJ） content in leaves by RP-HPLC. The results indicated that there were extremely significant differences between different Morus species， and Morus alba had the highest 1-DNJ content. There were also significant differences between different mulberry cultivars. Jinxuan6 and Qiuyu were the cultivars with the highest 1-DNJ content belonging to M. multicaulis and M. alba respectively with the 1-DNJ content as 0.3281% and 0.2777% respectively， so they were suitable as special cultivars or breeding materials to develop 1-DNJ from mulberry leaves.
Key words 1-DNJ content； Mulberry cultivars； RP-HPLC
1-脱氧野尻霉素（1-deoxynojirimycin，1-DNJ）是一种哌啶类生物碱[1]，对α-葡萄糖苷酶有抑制作用，可降血糖、治疗糖尿病，此外还具有抗病毒、抗肿瘤转移等药理作用[2]，是桑（Morus alba L）和家蚕（Bombyx mori L）保健品降血糖功能的重要活性物质，也是衡量桑、蚕药用价值的重要指标之一。桑叶中1-DNJ的含量因品种、发育阶段、季节、地理气候等因素的不同而存在很大差异[3～11]。
山东省桑树资源丰富、栽培历史悠久，有鲁桑种、白桑种、广东桑、山桑和瑞穗桑5个栽培种、200余个桑品种，具有广泛的适应性和代表性，因此研究山东桑属1-脱氧野尻霉素含量与品种间关系极具代表性。本研究选取代表性的桑品种17个，采用反相高效液相色谱法测定其桑叶的1-DNJ含量，从桑种间、桑品种间以及桑不同类型间差异等方面探求1-DNJ含量与分类学的关系，对于筛选1-DNJ高含量的桑资源，培育1-DNJ高的桑品种具有指导意义。
1 材料与方法
11 试验材料
17个代表性桑品种样品均采自山东省蚕业研究所桑树资源苗圃（烟台，2007年建），其中鲁桑9个品种，包括晋选6号、牛筋桑、7946、农桑14号、桐乡青（4X）、桐乡青（2X）、大鸡冠、育711、湖桑32、云桑1号；白桑6个品种，包括秋雨、嘉陵16号、新一之濑、陕桑305、油匠铛铛、辽育164；山桑2个品种，为山桑、剑持。
2011年6月上旬春蚕期采摘嫩叶，所有样品50℃烘干，粉碎过100目筛，4℃保存待测。
12 主要试剂及仪器
1-Deoxynojirimycin-HCl（1-DNJ-HCl，Sigma公司产品），9-Fluorenyl- methyl chloroformate（FMOC-Cl，Fluca公司产品），乙腈（色谱纯，天津市凯通化学试剂有限公司产品），试验用水为重蒸水，其它试剂皆为分析纯。
UV200Ⅱ高效液相色谱仪（大连依利特），KQ-600型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司生产）。
13 1-DNJ的测定方法
样品中1-DNJ含量采用反相高效液相色谱-紫外检测法测定[12]，每个处理重复测定2次，取平均值。
14 数据处理 试验数据采用SAS 90数据分析软件进行统计分析。
2 结果与分析
21 不同种间桑叶1-DNJ含量的变化规律
分别对1-DNJ标样、17种桑叶粉试样的衍生化反应混合物进行HPLC分析，分离图谱如图1、图2所示。测定白桑、鲁桑和山桑3个栽培桑种嫩叶的1-DNJ含量（表1），可以看出不同栽培桑种间桑叶的1-DNJ含量存在极显著性差异：白桑的1-DNJ含量最高，其质量分数达到0219%，山桑最低，仅为0171%。
22 不同品种间桑叶1-DNJ含量的变化规律
分别测定9个鲁桑品种、6个白桑品种和2个山桑品种的桑叶，其1-DNJ含量见表2～4，不同桑品种间1-DNJ含量存在极显著性差异：鲁桑中晋选6号1-DNJ含量最高，其质量分数达02777%，桐乡青（2X）含量最低；白桑中秋雨的含量最高，其质量分数达03281%，新一之濑最低为01141%。
3 结论
我国桑树种类多、自然分布广、栽培历史悠久，约有15个种及4个变种，是世界桑属植物资源最丰富的国家之一。桑树的1-脱氧野尻霉素（1-DNJ）含量因桑品种、栽培地区和气候以及树体药用部位不同存在很大的差异。
本研究结果表明：山东桑属不同栽培种间1-DNJ含量存在显著性差异，白桑、鲁桑中1-DNJ含量明显高于山桑，而白桑和鲁桑间差异性不显著；同一桑种不同品种间的1-DNJ含量差异显著，其中晋选6号和秋雨分别是白桑和鲁桑中含量最高的品种，达02777%和03281%。之前朱见等[5]、刘凡等[3]报道，鲁桑高于白桑和山桑，但差异未达到显著水平。结论不同可能是栽培地区和气候不同，也可能是本试验的供试品种较少。
本研究首次发现同品种桑的染色体倍数不同，其1-DNJ含量差别显著。以桐乡青为例， 4X桐乡青的含量几乎是2X桐乡青的15倍。因此进一步对1-DNJ含量与桑品种的倍性相关性进行研究，可能对药桑育种工作具有指导性意义。同时扩大调查桑种、品种范围和数量，可以更全面、准确地反映桑属1-DNJ含量变化与桑分类学的关系。参 考 文 献：
[1] Kato A， Asano N， Kizu H，et al Fagomine isomers and glycosides from Xanthocercis zambesiaca [J] NatProd， 1997， 60（3）：312-314
[2] 周晓玲，孙凌云，张 进，等1-脱氧野尻霉素的来源及合成研究进展[J] 蚕业科学，2011，37（1）： 105-111
[3] 陈 松，刘宏程，储一宁，等 12个桑品种桑叶中的1-脱氧野尻霉素含量测定与分析[J] 蚕业科学，2007，33（4）： 637-641
[4] Yatsunami K，Lchida M，Onodera S.The relationship between 1-deoxynojirimycin content and alpha-glucosidase inhibitory activity in leaves of 276 mulberry cultivars（Morus spp.）in Kyoto，Japan [J]. NatMed，2008，62：63-66
[5] 朱 见.桑叶、蚕体中1-脱氧野尻霉素的含量测定与分析[D].重庆：西南大学，2008
[6] 鲁战会，吴生文，唐 健，等 桑叶功效成分含量与产地关联性研究[J] 食品科技，2007，1：75-77
[7] 杨 梅 高效液相色谱法测定桑叶中1-脱氧野尻霉素的含量[J] 武警医学，2007，18（2）：121-123
[8] Meng X， Ouyang Z，Chang Y，et al Contrast of 1-deoxynojirimycin content in mulberry leaves from different habitats[J] Journal of Chinese Medicinal Materials，2008，31（1）：8-10
[9] 關丽萍，郑光浩，金晴昊，等.RP-HPLC测定不同地区、不同采集期桑叶中1-脱氧野尻霉素[J].中草药，2005，36（12）：1881-1882
[10] 叶晶晶，殷 浩，孙 波，等桑树中的1-脱氧野尻霉素含量变化规律研究[J] 蚕业科学，2009，35（4）：722-727
[11] 施新琴 家蚕和桑叶中1-脱氧野尻霉素含量变化的研究[D] 泰安：山东农业大学， 2006
[12] 施新琴，崔为正，裘立群，等 反相高效液相色谱-紫外检测法测定1-脱氧野尻霉素的含量[J] 蚕业科学，2006，32（1）：146-149
[13] 刘 凡，李平平，廖森泰，等 98份不同桑树品种资源的桑叶总生物碱及1-脱氧野尻霉素含量测定[J]蚕业科学，2012，38（2）：185-191 山 东 农 业 科 学 2012，44（12）：103～105
关键词：1-脱氧野尻霉素；桑品种；反相高效液相色谱法
中圖分类号：S888.2 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2012）12-0100-03
Determination of 1-Deoxynojimycin Contents in Leaves
of Some Mulberry Cultivars in Shandong Province
Li HuaXiu1， Chen ChuanJie1， Gu YinYu1， Shi XinQin1*， Li Feng2， Zhu Hong1
（1.Shandong Institute of Sericultural Science， Yantai 264002， China；
2.Department of Personnel， Shandong Academy of Agricultural Sciences， Jinan 250100， China）
Abstract In order to select mulberry cultivars with medicinal and health function adaptable to Shandong area， 17 representative mulberry cultivars were used to determine the 1-deoxynojimycin （1-DNJ） content in leaves by RP-HPLC. The results indicated that there were extremely significant differences between different Morus species， and Morus alba had the highest 1-DNJ content. There were also significant differences between different mulberry cultivars. Jinxuan6 and Qiuyu were the cultivars with the highest 1-DNJ content belonging to M. multicaulis and M. alba respectively with the 1-DNJ content as 0.3281% and 0.2777% respectively， so they were suitable as special cultivars or breeding materials to develop 1-DNJ from mulberry leaves.
Key words 1-DNJ content； Mulberry cultivars； RP-HPLC
1-脱氧野尻霉素（1-deoxynojirimycin，1-DNJ）是一种哌啶类生物碱[1]，对α-葡萄糖苷酶有抑制作用，可降血糖、治疗糖尿病，此外还具有抗病毒、抗肿瘤转移等药理作用[2]，是桑（Morus alba L）和家蚕（Bombyx mori L）保健品降血糖功能的重要活性物质，也是衡量桑、蚕药用价值的重要指标之一。桑叶中1-DNJ的含量因品种、发育阶段、季节、地理气候等因素的不同而存在很大差异[3～11]。
山东省桑树资源丰富、栽培历史悠久，有鲁桑种、白桑种、广东桑、山桑和瑞穗桑5个栽培种、200余个桑品种，具有广泛的适应性和代表性，因此研究山东桑属1-脱氧野尻霉素含量与品种间关系极具代表性。本研究选取代表性的桑品种17个，采用反相高效液相色谱法测定其桑叶的1-DNJ含量，从桑种间、桑品种间以及桑不同类型间差异等方面探求1-DNJ含量与分类学的关系，对于筛选1-DNJ高含量的桑资源，培育1-DNJ高的桑品种具有指导意义。
1 材料与方法
11 试验材料
17个代表性桑品种样品均采自山东省蚕业研究所桑树资源苗圃（烟台，2007年建），其中鲁桑9个品种，包括晋选6号、牛筋桑、7946、农桑14号、桐乡青（4X）、桐乡青（2X）、大鸡冠、育711、湖桑32、云桑1号；白桑6个品种，包括秋雨、嘉陵16号、新一之濑、陕桑305、油匠铛铛、辽育164；山桑2个品种，为山桑、剑持。
2011年6月上旬春蚕期采摘嫩叶，所有样品50℃烘干，粉碎过100目筛，4℃保存待测。
12 主要试剂及仪器
1-Deoxynojirimycin-HCl（1-DNJ-HCl，Sigma公司产品），9-Fluorenyl- methyl chloroformate（FMOC-Cl，Fluca公司产品），乙腈（色谱纯，天津市凯通化学试剂有限公司产品），试验用水为重蒸水，其它试剂皆为分析纯。
UV200Ⅱ高效液相色谱仪（大连依利特），KQ-600型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司生产）。
13 1-DNJ的测定方法
样品中1-DNJ含量采用反相高效液相色谱-紫外检测法测定[12]，每个处理重复测定2次，取平均值。
14 数据处理 试验数据采用SAS 90数据分析软件进行统计分析。
2 结果与分析
21 不同种间桑叶1-DNJ含量的变化规律
分别对1-DNJ标样、17种桑叶粉试样的衍生化反应混合物进行HPLC分析，分离图谱如图1、图2所示。测定白桑、鲁桑和山桑3个栽培桑种嫩叶的1-DNJ含量（表1），可以看出不同栽培桑种间桑叶的1-DNJ含量存在极显著性差异：白桑的1-DNJ含量最高，其质量分数达到0219%，山桑最低，仅为0171%。
22 不同品种间桑叶1-DNJ含量的变化规律
分别测定9个鲁桑品种、6个白桑品种和2个山桑品种的桑叶，其1-DNJ含量见表2～4，不同桑品种间1-DNJ含量存在极显著性差异：鲁桑中晋选6号1-DNJ含量最高，其质量分数达02777%，桐乡青（2X）含量最低；白桑中秋雨的含量最高，其质量分数达03281%，新一之濑最低为01141%。
3 结论
我国桑树种类多、自然分布广、栽培历史悠久，约有15个种及4个变种，是世界桑属植物资源最丰富的国家之一。桑树的1-脱氧野尻霉素（1-DNJ）含量因桑品种、栽培地区和气候以及树体药用部位不同存在很大的差异。
本研究结果表明：山东桑属不同栽培种间1-DNJ含量存在显著性差异，白桑、鲁桑中1-DNJ含量明显高于山桑，而白桑和鲁桑间差异性不显著；同一桑种不同品种间的1-DNJ含量差异显著，其中晋选6号和秋雨分别是白桑和鲁桑中含量最高的品种，达02777%和03281%。之前朱见等[5]、刘凡等[3]报道，鲁桑高于白桑和山桑，但差异未达到显著水平。结论不同可能是栽培地区和气候不同，也可能是本试验的供试品种较少。
本研究首次发现同品种桑的染色体倍数不同，其1-DNJ含量差别显著。以桐乡青为例， 4X桐乡青的含量几乎是2X桐乡青的15倍。因此进一步对1-DNJ含量与桑品种的倍性相关性进行研究，可能对药桑育种工作具有指导性意义。同时扩大调查桑种、品种范围和数量，可以更全面、准确地反映桑属1-DNJ含量变化与桑分类学的关系。参 考 文 献：
[1] Kato A， Asano N， Kizu H，et al Fagomine isomers and glycosides from Xanthocercis zambesiaca [J] NatProd， 1997， 60（3）：312-314
[2] 周晓玲，孙凌云，张 进，等1-脱氧野尻霉素的来源及合成研究进展[J] 蚕业科学，2011，37（1）： 105-111
[3] 陈 松，刘宏程，储一宁，等 12个桑品种桑叶中的1-脱氧野尻霉素含量测定与分析[J] 蚕业科学，2007，33（4）： 637-641
[4] Yatsunami K，Lchida M，Onodera S.The relationship between 1-deoxynojirimycin content and alpha-glucosidase inhibitory activity in leaves of 276 mulberry cultivars（Morus spp.）in Kyoto，Japan [J]. NatMed，2008，62：63-66
[5] 朱 见.桑叶、蚕体中1-脱氧野尻霉素的含量测定与分析[D].重庆：西南大学，2008
[6] 鲁战会，吴生文，唐 健，等 桑叶功效成分含量与产地关联性研究[J] 食品科技，2007，1：75-77
[7] 杨 梅 高效液相色谱法测定桑叶中1-脱氧野尻霉素的含量[J] 武警医学，2007，18（2）：121-123
[8] Meng X， Ouyang Z，Chang Y，et al Contrast of 1-deoxynojirimycin content in mulberry leaves from different habitats[J] Journal of Chinese Medicinal Materials，2008，31（1）：8-10
[9] 關丽萍，郑光浩，金晴昊，等.RP-HPLC测定不同地区、不同采集期桑叶中1-脱氧野尻霉素[J].中草药，2005，36（12）：1881-1882
[10] 叶晶晶，殷 浩，孙 波，等桑树中的1-脱氧野尻霉素含量变化规律研究[J] 蚕业科学，2009，35（4）：722-727
[11] 施新琴 家蚕和桑叶中1-脱氧野尻霉素含量变化的研究[D] 泰安：山东农业大学， 2006
[12] 施新琴，崔为正，裘立群，等 反相高效液相色谱-紫外检测法测定1-脱氧野尻霉素的含量[J] 蚕业科学，2006，32（1）：146-149
[13] 刘 凡，李平平，廖森泰，等 98份不同桑树品种资源的桑叶总生物碱及1-脱氧野尻霉素含量测定[J]蚕业科学，2012，38（2）：185-191 山 东 农 业 科 学 2012，44（12）：103～105