观察人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人脐静脉血管内皮细胞EA.hy926结构和功能的影响,并探讨其作用机制。
方法培养人脐静脉血管内皮细胞EA.hy926,分组加入1、10、100 μg/L TNF-α培养24 h,或加入100μg/L TNF-α培养3、8、12、24 h,Western blot检测细胞中血管扩张刺激磷蛋白(VASP)的表达水平;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测细胞中VASP mRNA的表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,透射电子显微镜观察细胞超微结构的变化。
结果TNF-α干预24 h不同浓度组VASP mRNA水平分别为0. 993±0. 045(对照组)、0. 801±0. 022 (1μg/L)、0. 626±0. 018(10μg/L)、0. 529±0. 017(100μg/L);蛋白水平分别为0. 849±0. 021(对照组)、0. 788±0. 028(1μg/L)、0. 364±0. 018(10μg/L)、0. 317±0. 023(100μg/L);细胞凋亡率分别为(2. 5±1. 0)%(对照组)、(14. 0±1. 1)%(1μg/L)、(24. 4±3. 8)%(10μg/L)、(36. 0±2. 5)%(100 μg/L)。100μg/L TNF-α干预不同时间组VASP mRNA表达分别为0. 829±0. 051(3 h)、0. 741± 0. 029(8 h)、0. 669±0. 026(12 h)、0. 528±0. 017(24 h),蛋白水平分别为0. 528±0. 201(3 h)、0. 470± 0. 016(8 h)、0. 299±0. 015(12 h)、0. 298±0. 016(24 h);细胞凋亡率分别为(5. 4±0. 9)%(3 h)、(11. 4±1. 2)%(8 h)、(21. 2±1. 4)%(12 h)、(36. 3±2. 1)%(24 h)。VASP mRNA及蛋白水平均呈时间及剂量依赖表达降低(P<0. 05),细胞凋亡率呈时间及剂量依赖升高(P< 0. 05)。
结论TNF-α通过破坏血管内皮细胞结构和功能导致血管内皮细胞通透性增高,呈时间与剂量依赖性。