高价特异半抗原雌二醇抗体及酶标雌二醇复合物的研制

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目的:制备出高价特异的半抗原雌二醇抗体和高纯度稳定的雌二醇-17半琥珀酸-辣根过氧化物酶(HRP)复合物。方法:主要使用材料包括半抗原载体复合物、半抗原活化体、HRP及免疫用新西兰纯系家兔。具体方法为:(1)自行设计小分子半抗原的微量快速免疫方案,免疫全过程半抗原雌二醇的总使用体重量为367.5μg/kg,免疫时间为11周。(2)首次建立活化4B珠与BSA交联的反相快速亲合免疫吸附技术,以除去抗载体抗体,批次特异纯化了抗雌二醇抗体,(3)改进皮质醇-17半琥珀酰胺-HRP的标记法,建立了雌二醇-17半琥珀酸-HRP标记技术。结果:研制出高价特异的抗雌二醇抗体,效价1∶5万以上、抗体的活性达5mg/L;抗载体BSA抗体的含量为0。首次制备出高纯度稳定的雌二醇-17半琥珀酸-HRP复合物;用ELISA法与自制固相E2抗体结合鉴定,复合物经SephadexG75纯化后A450峰值与A403及A280基本吻合,复合物的活性为5mg/L。结论:本研究建立的半抗原雌二醇抗体及酶标雌二醇复合物的制备、纯化及分析鉴定技术简便、快速经济,效果满意
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