【摘 要】
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目的探索正交设计在实时定量PCR检测条件优化中的应用，找出扩增ICAM-1基因的最佳条件。方法建立大鼠皮肤损伤模型，采用正交设计实时定量PCR的各影响条件，提取损伤处皮肤组织总RN
【机 构】
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山西医科大学法医学院法医病理学教研室
【基金项目】
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山西省留学回国人员基金资助项目(200528);山西省青年科技研究基金项目(2007021047)
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目的探索正交设计在实时定量PCR检测条件优化中的应用，找出扩增ICAM-1基因的最佳条件。方法建立大鼠皮肤损伤模型，采用正交设计实时定量PCR的各影响条件，提取损伤处皮肤组织总RNA反转录成cDNA，cDNA作为模板，通过特异性引物扩增ICAM-1基因。对扩增曲线和融解曲线制定评分标准，量化不同实验条件下的扩增结果并进行统计分析。结果退火温度、模板量和引物浓度直接影响扩增效果，但三因素间无相互作用。结果经统计学分析表明退火温度61℃、模板cDNA用量0．4μg和引物终浓度150μmol／L为实时定量PCR
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