【摘 要】
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目的观察内质网应激(ERS)对肠上皮细胞(IEC)凋亡的影响,探讨盐酸小檗碱(BBR)治疗溃疡性结肠炎(UC)的部分作用机制。方法原代培养小鼠IEC并行免疫荧光鉴定后,采用过氧化氢(H2O
【机 构】
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浙江中医药大学附属第二医院消化内科,浙江省立同德医院儿科
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目的观察内质网应激(ERS)对肠上皮细胞(IEC)凋亡的影响,探讨盐酸小檗碱(BBR)治疗溃疡性结肠炎(UC)的部分作用机制。方法原代培养小鼠IEC并行免疫荧光鉴定后,采用过氧化氢(H2O2)作用细胞24 h制备体外肠细胞ERS模型,同时给予不同剂量的BBR干预。采用CCK8法检测细胞活性变化,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡水平,蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测细胞中葡萄糖调节蛋白-78(GRP78)、门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12(caspase-12)和caspase-3蛋白的表达水平。结果 0.4 mmol/L的H2O2作用24 h后,与空白对照组比较,IEC的存活率明显下降,凋亡率明显上升,GRP78、活化形式的cleaved caspase-12和cleaved caspase-3表达水平均升高;若同时给予中、高剂量(1.0μmol/L、10.0μmol/L)BBR干预,与模型对照组相比,IEC的存活率升高,凋亡率下降,且GRP78、cleaved caspase-12和cleaved caspase-3的表达水平均明显下降,差异有统计学意义。结论 BBR能通过抑制ERS时caspase-12/caspase-3凋亡信号通路活化,从而抑制IEC的过度凋亡,保护肠黏膜屏障,这可能是BBR治疗UC的部分作用机制。
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