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[摘要] 目的 探讨Ki-67与P16这两项免疫组化细胞增殖标志指数在宫颈鳞癌癌前病变中的具体表达，分析其架构，并验证其所具有的诊断价值。 方法 择取2011年11月～2016年11月期间于笔者所在医院行宫颈癌筛查的90例受检对象，其中包括30例健康受检者，30例宫颈鳞状上皮内瘤变患者以及30例宫颈鳞癌患者，分别命名为A组、B组与C组。为三组受检者给予免疫组化检测，分析各组的Ki-67与P16表达。 结果 就Ki-67与P16的阳性表达率而言，C组>B组>A组，CIN（Cervical Intraepithelial Neoplasia，宫颈上皮内瘤变）Ⅲ>CIN Ⅱ >CIN Ⅰ，病变越严重，阳性表达率越高，且C组、B组分别与A组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 Ki-67与P16阳性表达率与患者宫颈组织病变程度轻重有较为密切的联系，临床可以根据Ki-67与P16的表达结果来鉴别患者宫颈组织的病变程度，给予患者准确的诊断。
[关键词] P16；Ki-67；宫颈鳞癌癌前病变；表达；诊断价值
[中图分类号] R737.33 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2017）14-203-03
Expression of P16 And Ki-67 in precancerous lesions and its diagnostic value in cervical squamous cell carcinoma
WANG Xiaoping
Department of Gynaecology，Dongguan Huangjiang Hospital，Dongguan 523400，China
[Abstract] Objective To investigate the expression of Ki-67 and P16 immunohistochemical markers in precancerous lesions of cervical squamous cell carcinoma，and to analyze their structure and verify their diagnostic value. Methods 90 patients with cervical cancer screening in the hospital from November 2011 to November 2016 were enrolled，including 30 healthy subjects 30 patients with cervical squamous intraepithelial neoplasia，and 30 patients with cervical squamous cell carcinoma，they were named group A，group B and group C，respectively.The expression of Ki-67 and P16 in each group was analyzed by immunohistochemistry. Results The order of positive rate of Ki-67 and P16 was group C>B>A group，CIN Ⅲ>CIN Ⅱ>CIN Ⅰ，and the more serious the lesion，the higher the positive expression rate.Compared group B and group C with group A，the differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion Ki-67 and P16 positive expression rate has a more closely link with the severity of cervical lesions in patients.The expression of Ki-67 and P16 can be used to identify the degree of cervical tissue and provide accurate diagnosis.
[Key words] P16；Ki-67；Precancerous lesions of cervical squamous cell carcinoma；Expression；Diagnostic value
宮颈癌从发生到发展都呈现出渐进性的演变过程，所耗费的时间少则数年，多则数十年，常规检测难以得到准确诊断结果，临床需要选用Ki-67与P16等作为免疫组化指标，借此对患者宫颈组织的病变程度给予明确鉴别，以实现对宫颈癌的有效预防[1-2]。本文选择2011年11月～2016年11月期间于本院接受宫颈癌筛查的90例受检者，试分析Ki-67与P16的表达以及其所具有的诊断价值。
1 资料与方法
1.1 一般资料
择取2011年11月～2016年11月期间于笔者所在医院行宫颈癌筛查的90例受检对象，其中包括30例健康受检者，30例宫颈鳞状上皮内瘤变患者以及30例宫颈鳞癌患者，分别命名为A组、B组与C组。对比三组受检者的基本资料：（1）A组：年龄22～58岁，平均（40.1±8.4）岁；B组：年龄23～57岁，平均（40.3±8.4）岁；CIN Ⅲ患者11例、CIN Ⅱ患者10例、CIN Ⅰ患者9例；C组年龄22～57岁，平均（40.2±8.4）岁；淋巴结转移患者16例，淋巴结无转移患者14例；组织学分级：Ⅰ级13例，Ⅱ级9例，Ⅲ级8例。三组受检者的一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究已获得伦理委员会批准。 1.2 方法
使用SP法为所有受检对象进行免疫组化检测，按照试剂盒说明书进行严格操作，将取自受检者体内的宫颈上皮标本先浸入10%甲醛溶液中，随后依次给予如下操作：脱水→透明→浸腊→石蜡包埋→切片（厚度为4?m）→HE染色，在光镜下观察标本的细胞形态，给予病理诊断并按照诊断结果分组。为标本染色，选择阳性片，对其进行Ki-67与P16的阳性对照；使用磷酸盐缓冲液作为一抗的代替，继续作阴性对照。注：试验所用材料-Ki-67、P16鼠抗人单克隆抗体与SP超敏试剂盒均购自福州迈新生物公司，产品标准编号为YZB/闽榕0071-2013。
1.3 观察指标
对比三组受检者的Ki-67、P16阳性表达率，尤其是B组中CIN Ⅰ～Ⅲ患者Ki-67、P16阳性表达率。Ki-67的阳性表达判定标准为：细胞核与细胞质均呈棕黄色，或是在细胞核与细胞质中发现棕黄色的颗粒，使用光镜进行高倍视野观察，可发现4区计数约在200个左右。若是细胞未着色，则为阴性（-）；若是阳性细胞染色率不足10%，则为弱表达（+）；若是阳性细胞染色率在10%～30%之间，则为中阳性（++）；若是阳性细胞染色率高于30%，则为强阳性（+++）[3-4]。
P16的阳性表达率判定标准为：在细胞核与细胞质中发现有黄棕色或棕褐色的颗粒。若为单个细胞染色且阳性细胞数不足5%，则为阴性（-）；若为分散状细胞团染色且阳性细胞数在5%～24%之间，则为弱阳性（+）；若为片状细胞染色且阳性细胞数在25%～50%之间，则为中阳性（++）；若为弥散状细胞染色且阳性细胞数多于50%，则为强阳性（+++）[5-6]。
1.4 统计学方法
参与实验的患者其临床检测所得数据均行统计学软件包SPSS进行检验。阳性表达率等计数资料采用百分数表示，采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 P16的阳性表达率
P16阴性表达率从高到低分别为：A组>B组CIN Ⅰ患者>B组CIN Ⅱ患者>B组CIN Ⅲ患者>C组；阳性表达率则与之相反，A组与其他几组之间比较差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。
2.2 Ki-67的阳性表达率
Ki-67阴性表达率从高到低分别为：A组>B组CIN Ⅰ患者>B组CIN Ⅱ患者>B组CIN Ⅲ患者>C组；阳性表达率则与之相反，A组与其他几组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。
3 讨论
宫颈癌是一种常见女性生殖系统恶性肿瘤，鳞状细胞癌是其组织学类型中最为常见的一种，患者通常起病于宫颈鳞状上皮内部出现瘤变，随后持续不断地发展，最终形成浸润性癌[7-8]。宫颈癌按照不同病理表现可以分为鳞癌、腺癌、鳞腺癌。其中腺癌可分为黏液腺癌与恶性腺瘤；鳞癌按照组织分化程度可以分为高分化鳞癌、中分化鳞癌以及低分化鳞癌；鳞腺癌则包括上述两种表现。宫颈鳞癌癌前病变是指鳞癌发生前在宫颈处发生的病变，由此而引发的宫颈癌前病变即为CIN Ⅲ。由于宫颈癌与其他一般性恶性肿瘤一样，在发展上较为较为缓慢，初期表现并不明显，大多数患者无法在癌前病变阶段得到准确的诊断结果，因此许多患者错失最佳治疗时机，无法治愈疾病，只能在中晚期接受化疗或放疗，以延长生存期限。对此，临床尝试从基因蛋白等其他角度进行探寻新的道路，以提高宫颈癌的早期筛选率。
从恶性肿瘤的发生来看，细胞增殖失控是最为主要的原因，而P16作为细胞增殖指数之一，同时也是调控细胞增生状况的主要基因，调控细胞是其固有的功能；Ki-67则可以反映出细胞群的增殖活性，决定了正常细胞周期中抗原决定簇是被迅速降解还是彻底失去，同样是重要的癌症标志物[9-10]。关于P16、Ki-67与宫颈癌变、癌前病变的关系，丛玲华、左云海等人均在各自的研究中有所提及，即：宫颈上皮肿瘤在发生与发展上源于P16、Ki-67等基因蛋白发生了变化，其表皮生长因子受体在蛋白酪氨酸激酶的影响下传导原癌基因的信号、调控细胞周期，这种基因蛋白的表达一般会随着宫颈病变的不断加重而持续增加，其阳性率会随着CIN等级的增加而增加[11-15]。而本研究结果中健康受检者、CIN Ⅰ～Ⅲ患者以及宫颈癌患者的阳性表达率分布特点恰好与上述研究结论相符，即宫颈癌前病变越严重的患者，其P16、Ki-67基因蛋白改变越明显，阳性率也就越高。因此临床可以将P16与Ki-67作为诊断宫颈组织是否发生癌变的主要指标，在宫颈鳞癌癌前病变的诊断中，更是可以借由这两项指标阳性率的高低来鉴别患者的病变处于CIN Ⅰ～Ⅲ的具体哪一阶段，也由此可见这两项指标在宫颈癌癌前病变中所具有的显著临床诊断价值。
鳞癌乃宫颈癌常见组织类型，CIN Ⅲ乃是鳞癌发生前最为严重的癌前病变阶段，也是治愈患者最后的治疗时机，临床可以借由检验患者在P16、Ki-67上的不同阳性表达率来鉴别与诊断患者的病变程度，以实现对宫颈癌的有效筛查。
[参考文献]
[1] 张燕，王一，王建华，等.p16、Ki-67在440例宫颈病变中的表达及其病理诊断价值[J].诊断病理学杂志，2013，20（3）：171-175.
[2] D.Mocu?a，T. Pop，F.Szasz，et al.Precancerous cervical lesions and immunomarkers for their prognosis[J].Studia Universitatis Vasile Goldis Arad，Seria Stiintele Vietii，2010， 20（2）：87-93.
[3] 朱梅娟.Ki67、P16和HPV在宮颈病变组织中的表达及临床意义[J].中国妇幼保健，2013，28（19）：3095-3097. [4] Takeshima M，Saitoh M，Kusano K，et al.High frequency of hypermethylation of p14，p15 and p16 in oral pre-cancerous lesions associated with betel-quid chewing in Sri Lanka[J].Journal of Oral Pathology & Medicine，2008，37（8）：475-479.
[5] 趙娟，马唯，吴林林，等.AEG-1、P16、KI-67蛋白在宫颈癌前病变中的表达与临床意义[J].中国性科学，2016，25（10）：35-39.
[6] Badiga S，Chambers MM，Huh W，et al.Expression of p16INK4A in cervical precancerous lesions is unlikely to be preventable by human papillomavirus vaccines[J].Cancer，2016，122（23）：3615-3623.
[7] Pavlovic B，Djukic V，Milovanovic J，et al.Morphometric analysis of Ki-67 and p16 expression in laryngeal precursor lesions[J].Archives of Oto-Rhino-Laryngology，2013，270（（4）：1405.
[8] 王娇，舒丽莎，陈书玲，等.P16、Ki67联合细胞学检查在宫颈脱落细胞中的诊断意义[J].中国妇幼保健，2016，31（10）：2176-2179.
[9] 汪玉，冯晓冬，南进军，等.P16、Ki67在宫颈上皮内瘤变中的表达及意义[J].湖北医药学院学报，2016，35（2）：131-133，156，100.
[10] Dong CX，Deng DJ，Pan KF，et al.Promoter methylation of p16，associated with Helicobacter pylori， infection in precancerous gastric lesions：A population-based study[J]. International Journal of Cancer Journal International Du Cancer，2009，124（2）：434.
[11] 左云海，袁迎春.p16和Ki-67在宫颈鳞癌癌前病变中的表达及其诊断价值[J].现代中西医结合杂志，2013，22（27）：2974-2975，2983.
[12] 丛玲华，戴珍珍，方来福，等.EGFR、P16、Ki67和P53在宫颈鳞状上皮内瘤变和宫颈鳞状细胞癌中表达的临床意义[J].中国现代医生，2013，51（2）：87-90.
[13] 董丽杰，王莉.P16、Ki-67在宫颈癌前病变分层管理中的作用[J].河南医学研究，2016，25（10）：1782-1783.
[14] 黄锦成，朱付华，陈飞虎，等.广西北流地区733例宫颈上皮内瘤变临床病理分析[J].广西医科大学学报，2014，31（2）：270-271.
[15] 刘玉艳，沈久洋，朱安超，等.pl6/Ki-67细胞学双染在子宫颈癌筛查中应用价值[J].临床与实验病理学杂志，2017，33（1）：38-41.
（收稿日期：2017-03-06）
[关键词] P16；Ki-67；宫颈鳞癌癌前病变；表达；诊断价值
[中图分类号] R737.33 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2017）14-203-03
Expression of P16 And Ki-67 in precancerous lesions and its diagnostic value in cervical squamous cell carcinoma
WANG Xiaoping
Department of Gynaecology，Dongguan Huangjiang Hospital，Dongguan 523400，China
[Abstract] Objective To investigate the expression of Ki-67 and P16 immunohistochemical markers in precancerous lesions of cervical squamous cell carcinoma，and to analyze their structure and verify their diagnostic value. Methods 90 patients with cervical cancer screening in the hospital from November 2011 to November 2016 were enrolled，including 30 healthy subjects 30 patients with cervical squamous intraepithelial neoplasia，and 30 patients with cervical squamous cell carcinoma，they were named group A，group B and group C，respectively.The expression of Ki-67 and P16 in each group was analyzed by immunohistochemistry. Results The order of positive rate of Ki-67 and P16 was group C>B>A group，CIN Ⅲ>CIN Ⅱ>CIN Ⅰ，and the more serious the lesion，the higher the positive expression rate.Compared group B and group C with group A，the differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion Ki-67 and P16 positive expression rate has a more closely link with the severity of cervical lesions in patients.The expression of Ki-67 and P16 can be used to identify the degree of cervical tissue and provide accurate diagnosis.
[Key words] P16；Ki-67；Precancerous lesions of cervical squamous cell carcinoma；Expression；Diagnostic value
宮颈癌从发生到发展都呈现出渐进性的演变过程，所耗费的时间少则数年，多则数十年，常规检测难以得到准确诊断结果，临床需要选用Ki-67与P16等作为免疫组化指标，借此对患者宫颈组织的病变程度给予明确鉴别，以实现对宫颈癌的有效预防[1-2]。本文选择2011年11月～2016年11月期间于本院接受宫颈癌筛查的90例受检者，试分析Ki-67与P16的表达以及其所具有的诊断价值。
1 资料与方法
1.1 一般资料
择取2011年11月～2016年11月期间于笔者所在医院行宫颈癌筛查的90例受检对象，其中包括30例健康受检者，30例宫颈鳞状上皮内瘤变患者以及30例宫颈鳞癌患者，分别命名为A组、B组与C组。对比三组受检者的基本资料：（1）A组：年龄22～58岁，平均（40.1±8.4）岁；B组：年龄23～57岁，平均（40.3±8.4）岁；CIN Ⅲ患者11例、CIN Ⅱ患者10例、CIN Ⅰ患者9例；C组年龄22～57岁，平均（40.2±8.4）岁；淋巴结转移患者16例，淋巴结无转移患者14例；组织学分级：Ⅰ级13例，Ⅱ级9例，Ⅲ级8例。三组受检者的一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究已获得伦理委员会批准。 1.2 方法
使用SP法为所有受检对象进行免疫组化检测，按照试剂盒说明书进行严格操作，将取自受检者体内的宫颈上皮标本先浸入10%甲醛溶液中，随后依次给予如下操作：脱水→透明→浸腊→石蜡包埋→切片（厚度为4?m）→HE染色，在光镜下观察标本的细胞形态，给予病理诊断并按照诊断结果分组。为标本染色，选择阳性片，对其进行Ki-67与P16的阳性对照；使用磷酸盐缓冲液作为一抗的代替，继续作阴性对照。注：试验所用材料-Ki-67、P16鼠抗人单克隆抗体与SP超敏试剂盒均购自福州迈新生物公司，产品标准编号为YZB/闽榕0071-2013。
1.3 观察指标
对比三组受检者的Ki-67、P16阳性表达率，尤其是B组中CIN Ⅰ～Ⅲ患者Ki-67、P16阳性表达率。Ki-67的阳性表达判定标准为：细胞核与细胞质均呈棕黄色，或是在细胞核与细胞质中发现棕黄色的颗粒，使用光镜进行高倍视野观察，可发现4区计数约在200个左右。若是细胞未着色，则为阴性（-）；若是阳性细胞染色率不足10%，则为弱表达（+）；若是阳性细胞染色率在10%～30%之间，则为中阳性（++）；若是阳性细胞染色率高于30%，则为强阳性（+++）[3-4]。
P16的阳性表达率判定标准为：在细胞核与细胞质中发现有黄棕色或棕褐色的颗粒。若为单个细胞染色且阳性细胞数不足5%，则为阴性（-）；若为分散状细胞团染色且阳性细胞数在5%～24%之间，则为弱阳性（+）；若为片状细胞染色且阳性细胞数在25%～50%之间，则为中阳性（++）；若为弥散状细胞染色且阳性细胞数多于50%，则为强阳性（+++）[5-6]。
1.4 统计学方法
参与实验的患者其临床检测所得数据均行统计学软件包SPSS进行检验。阳性表达率等计数资料采用百分数表示，采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 P16的阳性表达率
P16阴性表达率从高到低分别为：A组>B组CIN Ⅰ患者>B组CIN Ⅱ患者>B组CIN Ⅲ患者>C组；阳性表达率则与之相反，A组与其他几组之间比较差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。
2.2 Ki-67的阳性表达率
Ki-67阴性表达率从高到低分别为：A组>B组CIN Ⅰ患者>B组CIN Ⅱ患者>B组CIN Ⅲ患者>C组；阳性表达率则与之相反，A组与其他几组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。
3 讨论
宫颈癌是一种常见女性生殖系统恶性肿瘤，鳞状细胞癌是其组织学类型中最为常见的一种，患者通常起病于宫颈鳞状上皮内部出现瘤变，随后持续不断地发展，最终形成浸润性癌[7-8]。宫颈癌按照不同病理表现可以分为鳞癌、腺癌、鳞腺癌。其中腺癌可分为黏液腺癌与恶性腺瘤；鳞癌按照组织分化程度可以分为高分化鳞癌、中分化鳞癌以及低分化鳞癌；鳞腺癌则包括上述两种表现。宫颈鳞癌癌前病变是指鳞癌发生前在宫颈处发生的病变，由此而引发的宫颈癌前病变即为CIN Ⅲ。由于宫颈癌与其他一般性恶性肿瘤一样，在发展上较为较为缓慢，初期表现并不明显，大多数患者无法在癌前病变阶段得到准确的诊断结果，因此许多患者错失最佳治疗时机，无法治愈疾病，只能在中晚期接受化疗或放疗，以延长生存期限。对此，临床尝试从基因蛋白等其他角度进行探寻新的道路，以提高宫颈癌的早期筛选率。
从恶性肿瘤的发生来看，细胞增殖失控是最为主要的原因，而P16作为细胞增殖指数之一，同时也是调控细胞增生状况的主要基因，调控细胞是其固有的功能；Ki-67则可以反映出细胞群的增殖活性，决定了正常细胞周期中抗原决定簇是被迅速降解还是彻底失去，同样是重要的癌症标志物[9-10]。关于P16、Ki-67与宫颈癌变、癌前病变的关系，丛玲华、左云海等人均在各自的研究中有所提及，即：宫颈上皮肿瘤在发生与发展上源于P16、Ki-67等基因蛋白发生了变化，其表皮生长因子受体在蛋白酪氨酸激酶的影响下传导原癌基因的信号、调控细胞周期，这种基因蛋白的表达一般会随着宫颈病变的不断加重而持续增加，其阳性率会随着CIN等级的增加而增加[11-15]。而本研究结果中健康受检者、CIN Ⅰ～Ⅲ患者以及宫颈癌患者的阳性表达率分布特点恰好与上述研究结论相符，即宫颈癌前病变越严重的患者，其P16、Ki-67基因蛋白改变越明显，阳性率也就越高。因此临床可以将P16与Ki-67作为诊断宫颈组织是否发生癌变的主要指标，在宫颈鳞癌癌前病变的诊断中，更是可以借由这两项指标阳性率的高低来鉴别患者的病变处于CIN Ⅰ～Ⅲ的具体哪一阶段，也由此可见这两项指标在宫颈癌癌前病变中所具有的显著临床诊断价值。
鳞癌乃宫颈癌常见组织类型，CIN Ⅲ乃是鳞癌发生前最为严重的癌前病变阶段，也是治愈患者最后的治疗时机，临床可以借由检验患者在P16、Ki-67上的不同阳性表达率来鉴别与诊断患者的病变程度，以实现对宫颈癌的有效筛查。
[参考文献]
[1] 张燕，王一，王建华，等.p16、Ki-67在440例宫颈病变中的表达及其病理诊断价值[J].诊断病理学杂志，2013，20（3）：171-175.
[2] D.Mocu?a，T. Pop，F.Szasz，et al.Precancerous cervical lesions and immunomarkers for their prognosis[J].Studia Universitatis Vasile Goldis Arad，Seria Stiintele Vietii，2010， 20（2）：87-93.
[3] 朱梅娟.Ki67、P16和HPV在宮颈病变组织中的表达及临床意义[J].中国妇幼保健，2013，28（19）：3095-3097. [4] Takeshima M，Saitoh M，Kusano K，et al.High frequency of hypermethylation of p14，p15 and p16 in oral pre-cancerous lesions associated with betel-quid chewing in Sri Lanka[J].Journal of Oral Pathology & Medicine，2008，37（8）：475-479.
[5] 趙娟，马唯，吴林林，等.AEG-1、P16、KI-67蛋白在宫颈癌前病变中的表达与临床意义[J].中国性科学，2016，25（10）：35-39.
[6] Badiga S，Chambers MM，Huh W，et al.Expression of p16INK4A in cervical precancerous lesions is unlikely to be preventable by human papillomavirus vaccines[J].Cancer，2016，122（23）：3615-3623.
[7] Pavlovic B，Djukic V，Milovanovic J，et al.Morphometric analysis of Ki-67 and p16 expression in laryngeal precursor lesions[J].Archives of Oto-Rhino-Laryngology，2013，270（（4）：1405.
[8] 王娇，舒丽莎，陈书玲，等.P16、Ki67联合细胞学检查在宫颈脱落细胞中的诊断意义[J].中国妇幼保健，2016，31（10）：2176-2179.
[9] 汪玉，冯晓冬，南进军，等.P16、Ki67在宫颈上皮内瘤变中的表达及意义[J].湖北医药学院学报，2016，35（2）：131-133，156，100.
[10] Dong CX，Deng DJ，Pan KF，et al.Promoter methylation of p16，associated with Helicobacter pylori， infection in precancerous gastric lesions：A population-based study[J]. International Journal of Cancer Journal International Du Cancer，2009，124（2）：434.
[11] 左云海，袁迎春.p16和Ki-67在宫颈鳞癌癌前病变中的表达及其诊断价值[J].现代中西医结合杂志，2013，22（27）：2974-2975，2983.
[12] 丛玲华，戴珍珍，方来福，等.EGFR、P16、Ki67和P53在宫颈鳞状上皮内瘤变和宫颈鳞状细胞癌中表达的临床意义[J].中国现代医生，2013，51（2）：87-90.
[13] 董丽杰，王莉.P16、Ki-67在宫颈癌前病变分层管理中的作用[J].河南医学研究，2016，25（10）：1782-1783.
[14] 黄锦成，朱付华，陈飞虎，等.广西北流地区733例宫颈上皮内瘤变临床病理分析[J].广西医科大学学报，2014，31（2）：270-271.
[15] 刘玉艳，沈久洋，朱安超，等.pl6/Ki-67细胞学双染在子宫颈癌筛查中应用价值[J].临床与实验病理学杂志，2017，33（1）：38-41.
（收稿日期：2017-03-06）