石蜡制片是病理学基础研究和疾病诊断中常用的技术,也是国内外药物非临床安全性评价(GLP)实验室病理学研究的主要技术手段,病理的制片水平直接影响到病理诊断的全面性和准确性。在石蜡制片过程中,透明剂在组织处理过程中及切片制备过程中均起到关键性作用,包括组织脱水后浸蜡前组织的透明、切片染色前切片的脱蜡以及染色后封片前切片的透明等。环保型透明剂,又名Van-Clear,国外及国内近年来均已有生产,不含二甲苯、丙酮等挥发性有毒物质,为无色无味有机溶剂,可替代二甲苯用于全自动脱水机、染色机、封片机,组织的脱蜡、透明及封片。环保型透明剂优点:①环保型透明成分中不含二甲苯、丙酮等有毒有害物质,使用过程中对实验人员的伤害较二甲苯明显减小。②透明剂性质温和,在透明过程中超出一定时间对组织的损伤程度较低。能够避免如二甲苯透明过程中透明时间偏长容易造成组织变脆,从而影响切片的弊端,也同时避免组织过度收缩变形,影响病理诊断。③透明组织染色效果好,切片透明后组织容易着色,细胞浆和细胞核染色鲜艳,色饱和度满意,对比清晰。同时也不影响组织的特殊染色,如:PAS和massion三色等,也未见对免疫组化染色有明显影响。④对仪器不具腐蚀性,不易燃易爆,其沸点为180℃,自燃点为420℃,可安全使用。环保型透明剂缺点:①透明时间较二甲苯透明时间长,几乎为二甲苯透明时间的2倍以上。室温18～25℃下,透明剂脱水中透明需分三步,时间分别为2 h,1 h和1 h;切片脱蜡分三步,时间分别为30 min,5 min和5 min;封片前切片透明也分三步,时间分别为5 min,5 min和5 min。每步骤中,时间可稍稍延长,但时间太短或低于3 min可能会对效果产生影响。②透明时间长短受季节影响,夏季室温高,相对透明时间缩短,而冬季室温低,则透明时间需相对延长。室温在15℃以下,呈出现在规定透明时间内透明不彻底现象,建议切片脱蜡时间延长至1 h以上甚至2 h。而脱水过程中影响不大,因为脱水机运行过程中,机器有一定加热作用,且脱水机采用循环进水方式,试剂分子活跃性更强。③试剂消耗大,相对二甲苯成本稍偏高。实验中需根据样品量的多少,不定时更换透明剂,以保证实验效果。总体来看,运用环保型透明剂的优势还是大于其缺点,可代替二甲苯在病理切片制备过程中的运用,不影响切片的制备质量,但在GLP条件下,更应注意中间环节的把握以及不同外界环境影响下的质量控制。