【摘 要】
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为了获取和发掘α-硫辛酸作用于肝癌细胞后的转录组数据库和Bcl-2家族蛋白差异表达基因,本研究采用高通量测序技术Illumina HiSeqTM 2000对BEL-7402细胞的α-硫辛酸处理组和
【机 构】
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广州医科大学研究生院,广州,511436;深圳市第二人民医院,深圳大学第一附属医院,生物样本库,深圳市肿瘤免疫基因治疗及临床应用工程实验室,深圳,518035;东莞市东阳光科研发有限公司,远程电子医疗
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为了获取和发掘α-硫辛酸作用于肝癌细胞后的转录组数据库和Bcl-2家族蛋白差异表达基因,本研究采用高通量测序技术Illumina HiSeqTM 2000对BEL-7402细胞的α-硫辛酸处理组和对照组进行转录组测序,再进行系统的生物信息学分析并筛选出Bcl-2家族蛋白相关的差异表达基因.然后通过PCR及Western blotting技术检测部分基因的表达,来验证测序结果的准确性和可靠性.最后再用流式细胞仪检测α-硫辛酸对肝癌细胞系HepG2、BEL-7402凋亡率的影响.本次测序分析共获得4 671个差异表达基因,包括2 223个表达上调,2 448个表达下调.可归类到48个GO (Gene ontology)分类中,KEGG Pathway显著性富集共涉及6条途径,对差异性表达基因进一步筛选得到8个Bcl-2家族蛋白相关基因.PCR及Western blotting分析表明,在肝癌细胞HepG2、BEL-7402细胞中,α-硫辛酸处理组的Bax、Bak促凋亡基因mRNA及蛋白质水平表达均上调,与测序分析结果一致.流式细胞仪分析表明,α-硫辛酸可促进肝癌细胞系BEL-7402、HepG2凋亡,凋亡率分别为24.70％和25.40％,p值均小于0.05,差异具有统计学意义.本研究通过对α-硫辛酸作用于肝癌细胞后的转录组进行测序分析,得到了大量转录本信息,测序结果高效、准确,可为研究α-硫辛酸诱导肝癌细胞凋亡的分子机制提供重要线索.
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