【摘 要】
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目的:基于细胞焦亡探讨丹酚酸B和葛根素合用对氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R)损伤的SH-SY5Y神经细胞的保护作用及机制。方法:利用SH-SY5Y细胞构建OGD/R损伤模型,设立正常对照组(control)、模型组(OGD/R)、10 μmol·L-1丹酚酸B组(salvianolic acid B, Sal B)、1
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(82274407);
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目的:基于细胞焦亡探讨丹酚酸B和葛根素合用对氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R)损伤的SH-SY5Y神经细胞的保护作用及机制。方法:利用SH-SY5Y细胞构建OGD/R损伤模型,设立正常对照组(control)、模型组(OGD/R)、10 μmol·L-1丹酚酸B组(salvianolic acid B, Sal B)、100 μmol·L-1葛根素组(puerarin, Pue)、10 μmol·L-1丹酚酸B和100 μmol·L-1葛根素合用组(SP)及10 μmol·L-1NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体抑制剂MCC950组。除正常组外,其余各组细胞在氧糖剥夺6 h后迅速复糖复氧12 h进行OGD/R造模。采噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,光学显微镜下观测细胞形态,分光光度计法检测培养上清中乳酸脱氢酶(LDH) 释放率,Hoechst/PI染色检测细胞膜损伤情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测NLRP3、半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)、消皮素D(GSDMD)、凋亡斑点样蛋白(ASC)和白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA表达水平,免疫荧光检测NLRP3和caspase-1蛋白表达的变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测IL-1β、ASC、NLRP3、caspase-1和活化半胱氨酸蛋白酶1(cleaved caspase-1)蛋白表达的变化。结果:与正常组比较,模型组SH-SY5Y细胞存活率显著降低(P <0.01),细胞形态受损,培养上清中LDH渗漏率显著提高(P <0.01),细胞膜破损,细胞中NLRP3、caspase-1、GSDMD、ASC和IL-1β的mRNA表达水平显著提高(P <0.01),IL-1β、ASC、NLRP3、caspase-1和cleaved caspase-1蛋白的表达水平显著提高(P <0.01)。与模型组相比,丹酚酸B、葛根素与丹酚酸B和葛根素合用均能显著提高OGD/R损伤后SH-SY5Y细胞的存活率(P <0.01);与单用组相比,合用组具有更好的效果(P <0.01)。与模型组相比,丹酚酸B和葛根素合用及MCC950均能改善细胞形态,降低细胞上清液LDH的渗漏(P <0.05),减轻细胞膜损伤水平,降低SH-SY5Y细胞NLRP3、caspase-1、GSDMD、ASC和IL-1β的mRNA表达水平(P <0.05,P <0.01),降低IL-1β、ASC、NLRP3、caspase-1和cleaved caspase-1蛋白的表达水平(P <0.05,P <0.01)。结论:结果表明,丹酚酸B和葛根素合用能减轻OGD/R对SH-SY5Y细胞造成的损伤,这可能与其能够抑制细胞焦亡相关。
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