【摘 要】
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目的 构建库容量大、多样性好的核糖体展示单链抗体库,为进一步筛选单链抗体奠定基础.方法 对2006年10月1日至11月31日收集于中山大学附属第二医院的人外周血(健康成人2名,胃
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目的 构建库容量大、多样性好的核糖体展示单链抗体库,为进一步筛选单链抗体奠定基础.方法 对2006年10月1日至11月31日收集于中山大学附属第二医院的人外周血(健康成人2名,胃癌3例,肠癌3例,胰腺癌1例,每例各5 mL,新生儿2名各2 mL)分离淋巴细胞,提取RNA;利用RT-PCR克隆出全套重链可变区基因(variable region of heavy chin,VH)、轻链可变区基因(variable region of light chin,VL);然后利用重叠延伸PCR技术连接构建VH-VL单链抗体库.并通过连接T-Vector转化E.coli JM109大肠埃希菌,经蓝白筛选,挑取阳性克隆测序以鉴定单链抗体组装.结果 试验成功构建了单链抗体核糖体展示模板,其库容达1.1×1013.结论 大容量核糖体展示单链抗体库的构建为筛选多种人源性单链抗体奠定了基础.
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