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摘 要：目的：建立紫草中左旋紫草素的含量测定方法。方法：采用HPLC法，色谱柱为YWG-C-18，流动相为甲醇-0.025mol/L磷酸(80∶20)，测定波长：516nm，柱温为25℃，流速为1.0mL/min，进样量为20μL，结果：左旋紫草素在0.176~0.880μg间，左旋紫草素进样量与峰面积呈良好的线性y=2×107x+31103，R2=0.9993，测得紫草中左旋紫草素的平均含量为1.78%。结论：应用HPLC法测定紫草中的左旋紫草素含量，结果准确，重现性好。
关键词：紫草；左旋紫草素；HPLC；含量测定
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1673-2197(2008)05-041-02
紫草(Alkanna Tinctoria)是传统中药之一，属于紫草科多年生草本植物，以其干燥根入药。《中国药典》有收载，谓其性寒、味甘咸、归心肝经，具有凉血、活血、解毒透疹、补中益气作用。紫草的药理作用很多，如：抗生育作用、抗菌、抗炎、抗癌、降糖、保肝及提高肌体免疫功能。紫草中的有效成分为紫草宁衍生物，属萘醌类色素[1]。《中国药典》2005版<一部>采用紫外分光光度法测定左旋紫草素的含量。本实验采用HPLC(高效液相色谱)法对紫草中的左旋紫草素进行含量检测。
1 仪器与试剂
实验中紫草由亚洲大药房提供，左旋紫草素对照品由中国生物制品药品检定所提供，其余试剂均为分析纯。高效液相色谱仪(紫外可见检测器，LC-05Pi液体泵)，AG204电子天平，KQ2200B超声机
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件[2，3]
色谱柱：YWG-C-18柱；流动相：甲醇-0.025mol/l磷酸(80∶20)；柱温：25℃；流速：1.0mL/min；测定波长：516nm。按左旋紫草素计算理论塔板数为2500(>103)。在此条件下，样品中左旋紫草素与其他相关峰均能达到基本分离。
2.2 对照品溶液的配制
精密称定5.5mg左旋紫草素对照品置10mL容量瓶中，用甲醇定容到10mL，得0.55mg/mL对照品溶液。用移液管精密移取4mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀释定容到50mL，得浓度为0.044mg/mL对照品溶液。
2.3 供试品溶液的配制[4]
称取紫草10g，加入95%乙醇100mL，超声20min。放冷过滤，滤渣加入95%乙醇50mL超声10min。放冷过滤，合并滤液，加入2%的氢氧化钠溶液使溶液呈碱性(变蓝色)，过滤，滤液加酸调pH到呈酸性(变红色)，过滤，滤液减压浓缩回流至20mL左右。在50℃下进行干燥。精密称定提取物的重量，把提取物加入甲醇，超声溶解，定容在100mL的容量瓶中。
2.4 线性关系与标准曲线[5]
精密移取已经配制好的0.044mg/mL标准品溶液2.0mL，4.0mL，6.0mL，8.0mL，10.0mL于10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，分别吸取20ul，注入液相色谱中，测定色谱峰面积，得回归方程y=2×107x+31103，R2=0.9993。
2.5 精密度考察
用上述方法制备的供试品连续进6针，测定峰面积。考察相对标准偏差。见下表：
结果：精密度考察符合要求。
2.6 回收率的测定[6]
方法：取紫草粉末两份，各10g精密称定，置100mL具塞三角瓶中，一份加入左旋紫草素对照品溶液(0.044mg/mL)20mL作为对照品溶液；另一份不加作为样品溶液。然后各加入95%乙醇100mL超声20min。放冷过滤，滤渣加入95%乙醇50mL超声10min。放冷过滤，合并滤液，减压浓缩回流至20mL左右。在50℃下进行干燥。精密称定提取物的重量，把提取物加入甲醇超声溶解，定容在100mL的容量瓶中。见表2：
结果：回收率符合要求。
2.7 紫草中左旋紫草素的含量测定
方法：将不同批次的中药紫草制备成供试品进针，测定含量。见表3：
3 讨论
(1)在紫草的提取过程中，浸出液要浓缩到溶液体积20mL左右，使得乙醇的含量很少，才能利用加碱使紫草素溶于水相，过滤后加酸使沉淀析出。在加碱时不要剧烈摇动、搅拌，以免产生乳化效果，不利于提取；加酸时要使溶液变成红色，静置析出。
(2)由于紫草中紫草素含量很低，所以在进液相时浓度要比较大，使得误差能够减少。进针后，其色谱峰周期过长，在对照品出峰时间过后可以将流速由1.0mL/min提高到1.5mL/min。
(3)测定方法的选择。有文献报道用紫外分光光度法及薄层扫描测定紫草素的含量。本实验采用高效液相色谱法测定紫草中的左旋紫草素的含量，结果准确、重现性好、灵敏度高。
(4)样品测定结果表明，通过对样品颜色的观察发现，左旋紫草素含量高的成品颜色深红，而所测含量较低的成品颜色较浅，这可能与紫草原药材的质量有关。
参考文献：
[1] 卢贺起，丁家欣，魏雅川.紫草的实验研究进展[J].中国中医药信息，1998，5(1)：20.
[2] 马瑛，王嗣芩，黄猛.HPLC测定紫草中紫草素含量[J].中国药学，2000，35(20)：98.
[3] 李忠良，张敏，郭兰建.紫草中紫草素的含量测定[J].药物分析，1986，6(1)：41.
[4] 杨晓笛，卢锋，黄美充.中药紫草有效成分的提取[J].汕头大学学报，2002，17(4)：67.
[5] 孟宪生，沙明，曹爱民，张东方.HPLC法测定紫草及其制剂紫金油中左旋紫草素的含量[J].中草药，2003，34(7)：615.
[6] 陈发奎.常用中草药有效成分含量测定[M].北京：人民卫生出版社，1997：732~732.
(责任编辑：陈涌涛)
关键词：紫草；左旋紫草素；HPLC；含量测定
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1673-2197(2008)05-041-02
紫草(Alkanna Tinctoria)是传统中药之一，属于紫草科多年生草本植物，以其干燥根入药。《中国药典》有收载，谓其性寒、味甘咸、归心肝经，具有凉血、活血、解毒透疹、补中益气作用。紫草的药理作用很多，如：抗生育作用、抗菌、抗炎、抗癌、降糖、保肝及提高肌体免疫功能。紫草中的有效成分为紫草宁衍生物，属萘醌类色素[1]。《中国药典》2005版<一部>采用紫外分光光度法测定左旋紫草素的含量。本实验采用HPLC(高效液相色谱)法对紫草中的左旋紫草素进行含量检测。
1 仪器与试剂
实验中紫草由亚洲大药房提供，左旋紫草素对照品由中国生物制品药品检定所提供，其余试剂均为分析纯。高效液相色谱仪(紫外可见检测器，LC-05Pi液体泵)，AG204电子天平，KQ2200B超声机
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件[2，3]
色谱柱：YWG-C-18柱；流动相：甲醇-0.025mol/l磷酸(80∶20)；柱温：25℃；流速：1.0mL/min；测定波长：516nm。按左旋紫草素计算理论塔板数为2500(>103)。在此条件下，样品中左旋紫草素与其他相关峰均能达到基本分离。
2.2 对照品溶液的配制
精密称定5.5mg左旋紫草素对照品置10mL容量瓶中，用甲醇定容到10mL，得0.55mg/mL对照品溶液。用移液管精密移取4mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀释定容到50mL，得浓度为0.044mg/mL对照品溶液。
2.3 供试品溶液的配制[4]
称取紫草10g，加入95%乙醇100mL，超声20min。放冷过滤，滤渣加入95%乙醇50mL超声10min。放冷过滤，合并滤液，加入2%的氢氧化钠溶液使溶液呈碱性(变蓝色)，过滤，滤液加酸调pH到呈酸性(变红色)，过滤，滤液减压浓缩回流至20mL左右。在50℃下进行干燥。精密称定提取物的重量，把提取物加入甲醇，超声溶解，定容在100mL的容量瓶中。
2.4 线性关系与标准曲线[5]
精密移取已经配制好的0.044mg/mL标准品溶液2.0mL，4.0mL，6.0mL，8.0mL，10.0mL于10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，分别吸取20ul，注入液相色谱中，测定色谱峰面积，得回归方程y=2×107x+31103，R2=0.9993。
2.5 精密度考察
用上述方法制备的供试品连续进6针，测定峰面积。考察相对标准偏差。见下表：
结果：精密度考察符合要求。
2.6 回收率的测定[6]
方法：取紫草粉末两份，各10g精密称定，置100mL具塞三角瓶中，一份加入左旋紫草素对照品溶液(0.044mg/mL)20mL作为对照品溶液；另一份不加作为样品溶液。然后各加入95%乙醇100mL超声20min。放冷过滤，滤渣加入95%乙醇50mL超声10min。放冷过滤，合并滤液，减压浓缩回流至20mL左右。在50℃下进行干燥。精密称定提取物的重量，把提取物加入甲醇超声溶解，定容在100mL的容量瓶中。见表2：
结果：回收率符合要求。
2.7 紫草中左旋紫草素的含量测定
方法：将不同批次的中药紫草制备成供试品进针，测定含量。见表3：
3 讨论
(1)在紫草的提取过程中，浸出液要浓缩到溶液体积20mL左右，使得乙醇的含量很少，才能利用加碱使紫草素溶于水相，过滤后加酸使沉淀析出。在加碱时不要剧烈摇动、搅拌，以免产生乳化效果，不利于提取；加酸时要使溶液变成红色，静置析出。
(2)由于紫草中紫草素含量很低，所以在进液相时浓度要比较大，使得误差能够减少。进针后，其色谱峰周期过长，在对照品出峰时间过后可以将流速由1.0mL/min提高到1.5mL/min。
(3)测定方法的选择。有文献报道用紫外分光光度法及薄层扫描测定紫草素的含量。本实验采用高效液相色谱法测定紫草中的左旋紫草素的含量，结果准确、重现性好、灵敏度高。
(4)样品测定结果表明，通过对样品颜色的观察发现，左旋紫草素含量高的成品颜色深红，而所测含量较低的成品颜色较浅，这可能与紫草原药材的质量有关。
参考文献：
[1] 卢贺起，丁家欣，魏雅川.紫草的实验研究进展[J].中国中医药信息，1998，5(1)：20.
[2] 马瑛，王嗣芩，黄猛.HPLC测定紫草中紫草素含量[J].中国药学，2000，35(20)：98.
[3] 李忠良，张敏，郭兰建.紫草中紫草素的含量测定[J].药物分析，1986，6(1)：41.
[4] 杨晓笛，卢锋，黄美充.中药紫草有效成分的提取[J].汕头大学学报，2002，17(4)：67.
[5] 孟宪生，沙明，曹爱民，张东方.HPLC法测定紫草及其制剂紫金油中左旋紫草素的含量[J].中草药，2003，34(7)：615.
[6] 陈发奎.常用中草药有效成分含量测定[M].北京：人民卫生出版社，1997：732~732.
(责任编辑：陈涌涛)