【摘 要】
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目的 探讨体外诱导人脂肪间充质干细胞(hADSCs)向胰岛β样细胞分化的方法.方法 手术获取人脂肪组织,分离培养hADSCs,流式细胞术鉴定其分子表面标志.应用含胰十二指肠同源框因
【机 构】
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210008,南京医科大学鼓楼临床医学院老年科210008,南京医科大学鼓楼临床医学院内分泌科;210008,南京大学医学院附属鼓楼医院骨科;
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目的 探讨体外诱导人脂肪间充质干细胞(hADSCs)向胰岛β样细胞分化的方法.方法 手术获取人脂肪组织,分离培养hADSCs,流式细胞术鉴定其分子表面标志.应用含胰十二指肠同源框因子1(PDX1)与神经元素3(Ngn3)的慢病毒转染hADSCs,并联合乙基咔唑(NECA)及多种细胞因子进行诱导分化后,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测胰岛素分泌细胞特异基因肌腱膜的纤维肉瘤肿瘤基因同系物A(Mafa)、胰岛素1(Insulin1)、葡萄糖转运体2(Glut2)及叉头蛋白转录因子O1(FoxO1)的表达,采用免疫荧光法鉴定诱导后细胞内胰岛素及C肽的表达,采用化学发光法检测诱导后细胞的胰岛素分泌水平.结果 hADSCs、CD105、CD44、CD29及CD90表达阳性,CD45及CD34表达阴性.Real-time PCR结果显示诱导后的细胞高表达PDX1、Ngn3、Insulin1及Glut2;免疫荧光结果显示诱导后的细胞胞质内表达胰岛素及C肽;化学发光法测得诱导后的细胞胰岛素分泌量为(156.23 ±30.97) mIU/L,高糖刺激后分泌量为(836.50±231.22) mIU/L.结论 人脂肪间充质干细胞在体外可以通过转染含PDX1和Ngn3慢病毒并联合NECA及多种细胞因子的方法诱导分化为胰岛β样细胞.
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